2006年12月26日 中华血液学杂志 2006 Vol.27 No.9 P.606-610
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(上海)为了克隆人组织因子途径抑制物-2(human tissue factor pathway inhibitor-2,hTFPI-2)的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得有活性的目的蛋白。研究者应用RT-PCR法从人胎盘总RNA中获得人组织因子途径抑制物-2的编码基因,将该基因片段克隆至原核表达载体pET19b中,转化表达宿主BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。获得的包涵体经离子交换法进行纯化,并使其在体外进行复性。采用发色底物法测定hTFPI-2对纤溶酶、胰蛋白酶的抑制作用;明胶酶谱法测定对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)的抑制作用;采用人工基底膜法观察hTFPI-2对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响。结果 成功获得了序列完全正确hTFPI-2的编码基因,hTFPI-2在大肠杆菌中以包涵体的形式获得高效表达,占细菌总蛋白的20%~30%.经纯化、复性后可得到纯度大于90%的目的蛋白。复性后的hTFPI-2具有抑制胰蛋白酶、纤溶酶、MMP-2和MMP-9的活性,同时亦具有抑制纤维肉瘤细胞HT-1080侵袭转移的能力。可见 采用原核表达系统高效地获得了具有活性的hTFPI-2。
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