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(贵阳医学院附属医院，贵州贵阳 550001) 小花清风藤Sabia parviflora Wall．exRoxb为清风藤科清风藤属藤本植物，主要分布于云南、广西、贵州等地川。贵州产小花清风藤为布依族、苗族的民间药，因其有清热利湿、祛风止痛之功效，民间俗称为“小黄药”、“黄肿药”、“黄眼药”等。研究证明，齐墩果酸是其有效成分之一。该药材具有保肝、降酶、抗炎、强心、利尿、免疫和抗癌作用，是贵州少数民族地区用以治疗肝炎的有效药物之一。为进一步开发药用资源，笔者以齐墩果酸收率为考察指标，采用正交试验法对其提取工艺进行了研究，现报道如下。 l 仪器与试药 LC一2010型高效液相色谱仪(日本岛津)，LC—solution色谱数据工作站，超声清洗仪(北京医疗设备二厂)。小花清风藤釆收于贵州黔南地区，经本院生药研究室刘凡教授鉴定为清风藤属植物小花清风藤Sabia parviflora Wall．cx Roxb；齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110709—200304)；水为超纯水，其他试剂为分析纯，甲醇为色谱纯。 2 方法与结果 2．1 正交试验设计原则 对小花清风藤中齐墩果酸的提取条件采用两步正交试验进行优选，采用L9(34)表进行设计，分别考察3个因素，每个因素考察3个水平。即第一步正交试验以乙醇浓度、提取次数、回流提取时间作为考察因素，第二步正交试验以盐酸浓度、盐酸用量、回流提取的时间为考察因素，均以齐墩果酸的含量(％)作为考察指标。 2．2 第一步正交试验设计 因素水平见表1。称取小花清风藤药材粗粉约2．00 g，加入乙醇溶液4倍量(80mL)，水浴回流提取，抽滤，离心后取上清液浓缩至40 mL，加入20％盐酸40mL，加热回流3 h，加1倍量水，挥去部分乙醇，用氯仿萃取4次，每次10 mL，合并滤液，浓缩至干。用甲醇定容于10 mL量瓶中，用微孔滤膜过滤，取10 μL进样，测定，计算药材中齐墩果酸的含量。第一步正交设计试验和方差分析结果见表2、表3。从方差分析结果看，乙醇浓度(A)、提取次数(B)、回流提取时间(C)的影响无显著性差异；但由直观分析R值可知，最佳提取工艺为乙醇浓度70％，提取次数2次，回流提取时间1 h，其中乙醇浓度对小花清风藤中齐墩果酸的提取有较大的影响。 2．3 第二步正交试验设计 因素水平见表4。称取小花清风藤药材粗粉约2．O g，加入70％的乙醇溶液4倍量(80mL)，水浴回流提取两次，每次lh．抽滤，离心后取上清液浓缩至40 mL，加入盐酸，加热回流，加l倍量水，挥去部分乙醇，用氯仿萃取4次，每次10mL,合并滤液，浓缩至干，用甲醇定容于lOmL量瓶中，用微孔滤膜过滤，取10 μL进样，测定，并计算药材中齐墩果酸的含量。第二步正交设．计试验和方差分析结果见表5、表6。从方差分析结果可知：盐酸浓度 (A)、回流提取时间(D)的影响均有显著性差异，由直观分析可知其最佳提取工艺为AIB2D3，即盐酸浓度为15％，盐酸用量为浓缩液量的2倍，回流提取时间为4 h。但因盐酸用量(B)影响无显著性差异，本着节约原则，故最佳提取工艺为15％的盐酸溶液，剂量为浓缩液的1倍量(40mL)，水浴回流提取4h。 2．4 验证试验 取3批小花清风藤药材样品，用最佳提取工艺进行提取，结果3批样品中齐墩果酸的含量分别为O．325％，0．330％，0．306％(n：3)． 3 讨论 3．1 合并两步正交试验设计结果，可见小花清风藤中齐墩果酸的最佳提取工艺为：小花清风藤药材粉末2 g，加入70％的乙醇溶液80 mL，水浴回流提取2次，每次1 h，抽滤，合并滤液，离心后的上清液浓缩至40mL，加入15％的盐酸溶液40 mL，加热回流提取4h，加1倍量水，挥去部分乙醇，用氯仿萃取4次，每次lo mL，合并滤液，浓缩至干。 3．2 齐墩果酸是五环三萜类化合物，为白色针状结晶，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等溶剂，在植物中常以单体或皂苷的形式存在．从第一步正交试验结果得知，提取因素水平对结果影响不大，但从及值可看出，用70％的乙醇溶液提取时，齐墩果酸的含量较高；在第二步正交试验中改变提取条件(盐酸浓度等)，试验结果有了显著差异，说明了齐墩果酸在该植物中主要以苷类的形式存在，经过酸水解为游离形式，从方差分析可知，采用15％的盐酸溶液回流提取4 h，齐墩果酸的得率最高。曾以某些文献中所采用超声提取的方法，结果与回流提取的方法相比，其齐墩果酸的得率较少，因此，证明了以本方法提取小花清风藤中的齐墩果酸是可行的。 |
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