半巢式聚合酶链反应方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重
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2005年12月06日 中华血液学杂志 2005 Vol.26 No.10 P.589-592
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（广州）为了寻找敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)bcl-2/IgH基因重排，并通过测定产物的序列，以了解所建方法的可靠性。研究者运用专业引物设计软件设计bcl-2/IgH基因重排半巢式PCR引物，对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR(touch down PCR)扩增，检测bcl-2/IgH基因重排，并对其产物进行克隆和序列分析。结果通过一步法检测到bcl-2/IgH基因重排8例，其中DLBCL 6例，新鲜扁桃体组织2例；进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性，新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示:一步法检测到的8例中有3例为假阳性，而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2/IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191，LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。可见常用的检测bcl-2/IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性，其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合，进行半巢式PCR可以排除种假阳性扩增，提高诊断的准确性。
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