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| 2005年06月09日 中华整形外科杂志2004 Vol.20 No.5 P.372-376 6 (上海)为了通过检测体外培养的人肋软骨细胞老化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(aggrecan)的表达变化，为组织工程软骨构建的种子细胞选择适宜的回植时机，研究者取体外培养的P1～P5人肋软骨细胞，通过观察细胞形态，细胞增殖率，Alcian blue法定量检测每代Aggrecan中GAG含量，免疫组化蛋白水平观察Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及RT-PCR从mRNA水平分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达量。结果人肋软骨细胞从第3代起逐渐向成纤维样细胞形态转换；每代软骨细胞Aggrecan中GAG含量随传代次数逐渐降低，第3代后处于较低水平；Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达在蛋白水平及mRNA水平基本一致，第2代以前Ⅱ型胶原表达较强，Ⅰ型胶原表达较弱；之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱，Ⅰ型胶原表达逐渐增强；而Aggrecan在第3代以前表达较高，从第4代后明显下降。可见人软骨细胞体外培养老化过程中综合细胞扩增及细胞功能因素，第2代的软骨细胞(体外扩增约18.326倍)可作为构建人组织工程软骨的种子细胞。 |
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