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2006年07月27日 中华传染病杂志 2006 Vol.24 No.2 P.84-87
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（南京）为了研究变异的流感病毒非结构蛋白(NS1)对干扰素调节因子3(IRF-3)抑制作用的影响。研究者用A/FM/1/47、A/HK/1/68、A/HK/1/68-MA20、A/HK/1/68-MA20C和阳性对照Sendai病毒(SV)感染HEK293细胞，Western blot比较些病毒感染后磷酸化的迁移较慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型是否出现.亚克隆A/HK/1/68的野生型NS1和A/HK/1/68-MA20的变异型NS1至pcDNA3.1-flag构建flag-NS1野生型，flag-NS1变异型质粒，分别用两种质粒转染HEK293细胞，转染后16 h，感染SV 8 h，然后收集细胞，作Western印迹分析，用抗flag抗体鉴定野生型和变异型NS1的表达，用抗IRF-3抗体观测NS1对SV活化IRF-3的抑制作用，用荧光素酶功能分析的方法观测两种NS1对SV诱导的干扰素β启动子-pGL-2B荧光素酶活性的影响。结果感染的5种病毒中仅毒性较低的A/HK/1/68-MA20和阳性对照SV能使IRF-3磷酸化，感染MA20后9 h开始有IRF-3磷酸化，23 h和26 h最强，比较A/HK/1/68和A/HK/1/68-MA20的NS1序列，发现从cDNA起始的第94位核苷酸由T变成C，蛋白质的第23位由缬氨酸变成丙氨酸。NS1野生型和变异型均有高表达。可见 A/HK/1/68-MA20的NS1的点变异可导致失去野生型NS1的抑制干扰素β启动子活性的作用。
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