结肠直肠恶性转化中p16和Ras相关结构域家族蛋白1a的甲基化
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2006年05月26日 Mol Cancer Res 2006;4(5):303–9
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使用显微解剖法对甲醛固定石蜡包埋样品(FF-PEAT)的甲基化进行精确鉴定还存在着一些问题，因为样品体积过小而且DNA都已经遭到了破坏。其他的检测甲基化的方法，例如甲基特异性PCR(MSP)，要求对纯化的DNA进行亚硫酸氢钠修饰(SBM)，会导致大量的DNA损失。在载玻片上进行SBM可以使DNA在从肿瘤组织中分离出来前就已经进行了原位修饰，这可以省去DNA纯化步骤并可以进行组织定位的基因甲基化分析。科学家们对20份结肠直肠癌FF-PEAT样品都用上述方法进行了测试，并用瘤内腺瘤组分来检测结肠直肠恶性转化过程中基因甲基化情况。去石蜡化组织切片在亚硫酸氢钠溶液中60浸泡8小时后使用苏木精染色，然后进行显微解剖法进行分析。蛋白酶K裂解产物直接用作接下来的PCR的模板。使用载玻片SBM可以直接对282bp长的序列进行测序。用这种方法对DNA进行修饰，DNA的得率比常规方法高出2.6倍，平均转换率为97%，也未发现有假阳性或者假阴性。MSP揭示了结肠直肠癌恶性转化过程中由p16和Ras相关结构域家族蛋白1a甲基化引起的瘤内的不均一性。这种载玻片SBM可以应用于多种FF-PEAT的甲基化研究中。它可以对实体瘤进行详细的瘤内分析。这种方法可以大大的改进人们研究致癌作用过程的效果。
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