干细胞因子及其应用

　　自1990年美国3个研究组几乎同时报道干细胞因子以来，世界各地进行了广泛深入的研究。现将干细胞因子（SCF）的研究现状作一综述。

　　1　SCF的结构和理化性质

　　干细胞因子又称肥大细胞生长因子（MGF），Kit配体（KL）及Steel因子（SLF）。它是由骨髓微环境中的基质细胞产生的一种酸性糖蛋白。其糖基连在肽键的N和O基团上，相对分子质量31 000～36 000，由非共价结合的两个相同亚基组成。等电点PI=3.8。SCF共有273个氨基酸。从-25～-1为信号肽，+1～+189为膜外功能区，+190～+216为跨膜区，+217～+248为胞浆功能区。鼠与人的SCF有83%的同源性［1］。

　　SCF在小鼠由10号染色体Steel位点编码。在人位于12 q22～24。SCF有2种存在形式：可溶性和膜结合型。在人，编码248个氨基酸的mRNA（SCF248），其第6个外显子中有一蛋白切割位点。由此mRNA表达165个氨基酸的可溶性SCF。编码220个氨基酸的mRNA（SCF220），其第6个外显子中无蛋白切割位点。由此mRNA表达膜结合型SCF。在鼠，可溶性SCF可由SCF248在第6外显子切割或SCF248和SCF220的第7外显子切割而成。膜结合型SCF由SCF220表达。2种形式SCF均有生物学活性［2］。鼠和人SCF对人造血细胞几乎有相等的生物学活性，但对鼠细胞，鼠SCF比人SCF生物效应强800倍［3］。

　　2　SCF的生物学活性

　　基因重组SCF和天然SCF有着相同生物学活性。2种形式SCF对造血都起重要作用。但Dolci等［4］发现结合型SCF比可溶性SCF支持造血长几个星期，对原始胚细胞存活刺激作用以结合型SCF为强。可溶性SCF激活c-kit受体短暂，诱导细胞表面c-kit受体下调更迅速。

　　SCF和其他细胞因子一起诱导干和祖细胞增生、延长其存活期及引起干和祖细胞动员。虽然SCF的受体在祖细胞无显著不同，但SCF诱导红系祖细胞增生比粒-单祖细胞强，可能是其他特异性因素影响祖细胞对SCF的反应性［5］。给小鼠应用SCF和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，外周血干细胞和祖细胞第1天即达高峰，6周后正常。骨髓中干和祖细胞第1天下降，第14天升高达10倍，6周后正常。表明最初外周血干和祖细胞升高是由骨髓中动员到外周血［6］。Mauch等［7］报道SCF和IL-11合用增加长期骨髓增殖细胞（LTMRC）从骨髓动员到未切脾鼠的脾和切脾鼠的血液。Yonemura等［8］认为SCF单独在体外不能维持干细胞数量，体内作用是SCF和其他细胞因子相互作用的结果。

　　在体外SCF和IL-7协同促进前体B细胞增生。Takeda等［9］认为体内B细胞发育不是受体c-kit和SCF相互作用，而另一受体型酪氨酸激酶（FLK2）对B细胞发育比c-kit更重要。

　　SCF在肥大细胞发育和存活中起关键作用。小鼠SCF的基因缺失导致结缔组织和粘膜表面肥大细胞缺乏。由于SCF引起肥大细胞脱粒，应用时一般以减少剂量为代价。Nocka等［10］发现二硫化物相联系的二聚体SCF比普通SCF刺激细胞增生强10～20倍。但对肥大细胞脱粒并不比普通SCF强。

　　SCF既有化学激动性，也有化学趋化性。膜结合型SCF促进造血祖细胞回到骨髓。静脉输注kit+造血祖细胞后其沿着SCF的梯度移动到骨髓。这是由kit粘附到骨髓基质细胞表面的SCF引起［11］。Kim等［12］认为基质细胞源因子-1（SDF-1）只有化学趋化性，它作为生理抗移动因子抑制造血祖细胞移出骨髓。

　　应用SCF、促血小板生长因子(TPO)、IL-12、IL-3处理冷冻骨髓细胞移植给鼠，其恢复血小板和中性粒细胞比用未处理的骨髓移植早3～6 d［13］。在鼠模型中，受者在应用5-FU前和后给予SCF注射，可以使干细胞从静止期进入细胞周期。这样干细胞对5-FU敏感，易于杀死，为供者骨髓移入受者提供了稳定的内环境，有利于骨髓移植的成功［14］。

　　将虫荧光素酶基因连在质粒上，该基因以聚赖氨酸（PL）与抗生蛋白链菌素（SA）共价连接，生物素酰基化的SCF以生物素与SA连接，腺病毒与PL共价连接，用此载体转染人MBO2和MO-7e细胞（两者均表达c-kit），孵育2 h通过SCF与c-kit结合转染效率可达90%［15］。但Fielding等［16］报道逆转录病毒载体通过连接SCF使SCF与造血细胞表面c-kit粘附，则病毒不能转染造血细胞，对不表达c-kit的非造血细胞却能转染。

　　3　临床应用

　　曾经将血清SCF低下作为引起造血功能障碍的原因。据报道在再障、骨髓增生异常综合征，骨髓移植后患者血清SCF水平低下。Abkowitz等［17］检测了34例纯红系再障患者血清SCF与正常人比较，无显著统计学意义。认为血清SCF水平可能与临床无相关性。但血清SCF是可溶性SCF，至于膜结合型SCF尚无法检测。

　　Weaver等［18］将48例上皮卵巢癌患者第1天给予3 g·(m2)-1环磷酰胺输注，4 h输完，美司钠6 g·(m2)-1输注12 h。然后48例随机分成4组，每人均注射5 μg·kg·d-1G-CSF，每组中有9例加用重组人的SCF。按组别分别给予5 μg·kg-1.d-1、10 μg·kg-1.d-1、15 μg·kg-1.d-1、20 μg·kg-1.d-1。化疗后48 h开始应用，直到外周血WBC≥4.0×109 L-1。这时进行外周血单成分采集。结果发现长期培养起始细胞（LTC-IC）在SCF 20 μg·kg-1.d-1组比单用G-CSF组增加5.8倍,CD34+细胞增加3倍，CD34+CD33-细胞增加64倍。Glaspy等［19］将215例高危期乳癌患者化疗后随机分组，单用G-CSF 10 mg·kg-1.d-1达7 d，G-CSF 10 μg·kg-1.d-1和重组人SCF 5、10、15、20、25、30 μg·kg-1.d-1联合用药达7、10、13 d。每种疗法的最后3 d进行外周血白细胞单成分采集，结果发现应用20 μg·kg-1.d-1SCF和10 μg·kg-1.d-1G-CSF后，第5天开始进行外周血单采是动员外周血祖细胞的最适剂量和最佳方案。Begley等［20］将62例早期乳癌患者化疗前随机分组接受12 μg·kg-1.d-1G-CSF和同剂量G-CSF加rhSCF 5、10、15 μg·kg-1.d-1达7 d，以及用10 d 10 μg·kg-1.d-1SCF且第4天加用G-CSF达7 d。结果发现先用SCF 3 d作预治疗，再用二者联合治疗组，外周血造血祖细胞升高更加明显。SCF一般为皮下注射。最普遍的副反应是注射局部皮肤有轻度水肿，外有一圈红肿。一般在注射后4 h开始，持续24～48 h，以后恢复正常。偶有过敏反应报道，应用前可给予抗过敏预防［19］。

　　虽然干细胞因子的研究已经深入，但仍有尚未解决的问题。(1)SCF和其受体c-kit相互作用触发细胞内变化的具体机制有待继续阐明；(2)SCF的基础研究较多，临床应用不够广泛，对再障治疗效果尚不确定；(3)SCF在体外能引导载体转染，体内尚缺乏证据。

　　作者单位：南京铁道医学院　(南京　210009)

　　参考文献

　　1　Lyman SD,Williams DE.Biological activity of mast cell growth factor,a ligand for the c-kit proto-oncogene and product of the murine SL locus. Exp Hematol，1992,20(1):132

　　2　Huang EJ,Nocka KH,Buck J,et al.Differential expression and processing of twocell associated forms of the kit ligand:KL-1 and KL-2.Mol Biol Cell,1992,3:349

　　3　Martin FH,Suggs SV,Langley KE,et al.Primary structure and functional expression of rat and human stem cell factor DNAs.Cell,1990,63(1):203

　　4　Dolci S,Williams DE,Ernst MK,et al.Requirement for mast cell growth factor for primordial germ cell survival in culture.Nature,1991,352(6338):809

　　5　Olweus J,Terstapen LWMM,Thompson PA,et al.Expression and function of receptors for stem cell factor and erythropoietin during lineage commitment of human hematopoietic progenitor cells.Blood,1996(5),88:1594

　　6　Bodine DM,Seidel NE,Orlic D.Bone marrow collected 14 days after in vivo administration of granulocyte colony stimulating factor to mice has 10 fold more repopulating ability than untreated bone marrows.Blood,1996,88(1):89

　　7　Mauch P,Lamont C,Neben TY,et al.Hematopoitetic stem cells in the blood after stem cell factor and interleukin-11 administration:evidence for different machanisms of mobilization.Blood,1995,86(12):4674

　　8　Yonemura Y,Ku H,Lyman SD,et al.In vitro expansion of hematopoitic progenitors and maintenance of stem cells:comparison between flt3/flt2 ligand and kit ligand.Blood,1997,89(6):1915

　　9　Takeda S,Shimizu T,Rodewald HR.Interaction between c-kit and stem cell factor are not required for B cell development in vitro.Blood, 1997,89（2）:518

　　10　Nocka KH,Levine BA,Ko JL,et al.Increased growth promoting but not mast cell degranulation potential of a covalent dimer of c-kit ligand.Blood, 1997,90（10）:3874

　　11　Okumura N,Tsuji K,Ebihara Y,et al.Chemotactic and chemokinetic activities of stem cell factor on murine hematopoietic progenitor cells.Blood, 1996,87（10）:4100

　　12　Kim CH,Broxmeyer HE.In vitro behavior of hematopoietic progenitor cells under the influnce of chemoattractants:stromal cell derived factor-1,steel factor,and the bone marrow environment.Blood, 1998,91（1）:100

　　13　Ratajczak MZ,Ratajczak J,Machalinski B,et al.In vitro and in vivo evidence that ex vivo cytokine priming of donor marrow cells may ameliorate posttransplant thrombocytepenia.Blood, 1998,91（1）:353

　　14　Van os R,Dawes D,Mislow JMK,et al.Host conditioning with 5-fluorouracil and kit-ligand to provide for long term bone marrow engraftment.Blood, 1997,89（7）:2376

　　15　Schwarzenberger P,Spence SE,Gooya JM,et al.Targeted gene transfer to human hematopoietic progenitor cell lines through the c-kit receptor.Blood, 1996,87（2）:472

　　16　Fielding AK,Maurice M,Morling FJ,et al.Inverse targeting of retroviral vectors:selective gene transfer in a mixed population of hematopoietic and nonhematopoietic cells.Blood, 1998,91（5）:1802

　　17　Abkowitz JL,Hume H,Yancik SA,et al.Stem cell factor serum levels may not be clinically relevant ［letter］.Blood, 1996,87（9）:4017

　　18　Weaver A,Ryder D,Crowther D,et al.Increased numbers of long-term culture-initiating cells in the apheresis product of patients randomized to receive increasing doses of stem cell factor administered in combination with chemotherapy and a standard dose of granulocyte colony-stimulating factor.Blood, 1996,88（9）:3323

　　19　Glaspy JA,Shpall EJ,Lemaistre CF,et al.Peripheral blood progenitor cell mobilization using stem cell factor in combination with filgrastim in breast cancer patients.Blood, 1997,90（8）:2939

　　20　Begley CG,Basser R,Mansfield R,et al.Enhanced levels and enhanced clonogenic capacity of blood progenitor cells following administration of stem cell factor plus granulocyte colony stimulating factor to humans.Blood, 1997,90（9）:3378