冻干人纤维蛋白原制造及检定规程

冻干人纤维蛋白原制造及检定规程

　　本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆中分离、提纯、冻干并经病毒灭活处理制成。主要成份为纤维蛋白原，纯度在70%以上。含适量枸橼酸钠、氯化钠和葡萄糖作为稳定剂。不含防腐剂，专供静脉输注用。用于治疗产后大出血及因大手术、外伤或内出血等引起的纤维蛋白原缺乏而造成的凝血障碍。

　　1　制造

　　1.1 制造要求

　　1.1.1 对血浆的要求

　　1.1.1.1 血浆应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求

　　新鲜分离的液体血浆或冰冻血浆，去除冷沉淀以及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ后的血浆，均可用于生产。

　　1.1.1.2 分离后的血浆应保持无菌，否则应及时投料制造或低温水冰冻保存。冰冻保存期最长不应超过2年。

　　1.1.2 对制造工作室、设备及原材料的要求　

　　与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。

　　1.2 制造工艺

　　1.2.1 采用低温乙醇法提制，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。

　　1.2.2 分批

　　同一容器混合溶解的制品作为1批，不同机柜冻干的制品分别作为亚批。

　　1.2.3 溶解液及稳定剂的规定

　　溶解纤维蛋白原沉淀用的溶解液所含的稳定剂应符合下列规定：

　　枸橼酸三钠（2H2O）　　　　 1.2%（g/ml）

　　注射用葡萄糖　　　　　　　　　　5%（g/ml）

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　 0.85%（g/ml）

　　1.2.4 除菌过滤及分装

　　制品可直接滤入无菌的成品瓶内，每瓶纤维蛋白原装量应不少于出品规格。

　　1.2.5 冻干

　　过滤分装后应立即冻结， 并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1.2.5项的规定进行冻干，在冻干全过程中，制品温度不应超过35℃。

　　1.2.6 半成品检定

　　半成品应抽样做理化检查及热原质试验，并按亚批做无菌试验。

　　1.3 剂型与规格

　　为冻干剂型，每瓶成品含纤维蛋白原0.5、1.0、1.5或2.0g。

　　2　成品检定

　　2.1 抽样

　　每批成品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品应分别抽样做无菌及水分检定。

　　2.2 物理检查

　　2.2.1 外观

　　应为灰白色或淡黄色疏松体，无融化迹象。重溶后，溶液应澄明或轻微乳光，允许有少量细小絮状物或蛋白颗粒。

　　2.2.2 真空度

　　以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。

　　2.2.3 溶解时间

　　制品温度应先平衡至30～37℃，按瓶签标示量加30～37℃注射用水，为约1%蛋白浓度溶液，制品应在30分钟内完全溶解。

　　2.3 化学检定

　　按《生物制品化学检定规程》进行。

　　2.3.1 pH值

　　取2.2.3项下溶液测定，pH值应为6.8～7.8。

　　2.3.2 水分

　　水分含量应≤5%（g/g）。

　　2.3.3 纯度

　　取2.2.3项下溶液，用生理盐水稀释至每ml含纤维蛋白原2～3mg，用钨酸沉淀法测定蛋白含量。

　　另取上述稀释液10ml，加入每ml含0.3IU凝血酶溶液10ml，搅匀待凝固后，置一盛水的盘内加罩密封。在室温放置1～2小时。移置2～10℃过夜。然后搅碎凝块，离心（或过滤）分离清液。用钨酸沉淀法测定其残余蛋白量，按下式计算制品的纯度，应不低于70%。

　　纤维蛋白原制品纯度（%）=（蛋白总量—残余蛋白量）/蛋白总量×100

　　2.3.4 纤维蛋白原含量

　　根据2.3.3项的测定结果，按下式计算纤维蛋白原含量，应不低于出口规格。

　　纤维蛋白原含量（g）=蛋白总%（g/ml）×制品纯度%×总体积（ml）。

　　2.3.5 枸橼酸离子测定

　　取2.2.3项下溶液测定，枸橼酸离子含量应为1.1%～1.3%（g/ml）。

　　2.3.6 葡萄糖含量

　　应为4.5%～5.5%（g/ml）。

　　2.3.7 氯化钠含量

　　应为0.8%～0.9%（g/ml）。

　　2.4 凝固活力测定

　　于小试管内加入凝血酶溶液（3IU/ml）0.5ml，置37℃水浴预热1分钟，再中入2.2.3项下的溶液。用生理盐水稀释成每ml含3mg纤维蛋白原，加0.5ml，摇匀。置37℃水浴中观察其凝固时间。两次测定结果平均值应不超过60秒。

　　2.5 无菌试验

　　按《生物制品无菌试验规程》进行。

　　2.6 安全试验

　　2.6.1 豚鼠试验

　　用体重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射检品5ml（约1%蛋白浓度），注射后半小时内动物不应有明显异常反应，观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复度，判定标准同前。

　　2.6.2 小白鼠试验

　　用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射检品0.5ml（约1%蛋白浓度），半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上术要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。

　　2.7 热原质试验

　　按《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔每kg体重注射30mg纤维蛋白原。判定标准按该规程4.2项要求进行。

　　2.8 HBsAg检测

　　用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒检测，应为阴性。

　　2.9 抗HCV检测

　　用敏感的方法检测，应为阴性

　　2.10 抗HIV—1及2检测

　　用敏感方法检测，应为阴性。

　　2.11 鉴别试验

　　用免疫双扩散法，仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线。

　　2.12 根据病毒灭活方法，必要时增加相应的检查项目。

　　3　保存与效期

　　保存于10℃以下干燥处，效期自血浆投产之日起若成品水分含量低于3%者为5年；成品水分含量为2%～5%者为2年。

冻干人纤维蛋白原使用说明书

　　本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆中分离、提纯、冻干并经病毒灭活处理制成。为灰白色或淡黄色疏松体，主要成分为纤维蛋白原。纯度不低于70%含适量的枸橼酸钠、氯化钠和葡萄糖作稳定剂，不含防腐剂，专供静脉输注。用于治疗产后大出血及因大手术、外伤或内出血等引起的纤维蛋白原缺乏而造成的凝血障碍。

　　用法

　　用前应先以30～37℃的灭菌注射用水按标示量注入瓶内。轻轻摇动使制品全部溶解（切忌剧烈振摇致使蛋白变性）。然后用带有滤网装置的输血器进行静脉滴注。滴注速度一般以每分钟60滴左右为宜。用量应根据病情及临床检验结果决定，一般为1～6g。

　　注意事项

　　1.本品溶解后应为澄清略带乳光溶液，允许有微量细小的蛋白颗粒存在，为此用于输注的输血器应带有滤风装置，但如发现有大量或大块不溶物时，不可使用。

　　2.在寒冷季节溶解制品或制品刚从冷处取出时，应特别注意先使制品和溶解液的温度升高到30～37℃，然后进行溶解。温度过低往往会造成溶解困难并导致蛋白变性。

　　3.应在效期内使用。

　　保存

　　应严格保存于10℃以下避光干燥处。