新型病毒TTV感染的调查

　　根据调查5种肝炎病毒已有特异性检测手段，但目前仍有慢性肝病缺乏甲～戊型肝炎病毒感染标志［1］，一些暴发性肝衰竭也无已知病毒感染标志［2］；庚型肝炎病毒(HGV)部分地解释了非甲～戊型肝炎的病因，但HGV感染更多地发生于HBV或HCV感染患者［3，4］，且对肝脏的致病性尚未完全得到证实，提示尚有甲～戊、庚型肝炎病毒以外的病毒引起急、慢性肝炎。最近，日本学者认为在输血后肝炎患者中发现的输血传播性病毒(TTV)可能是一种新的肝炎病毒［5］；国内骆抗先等［6］也在一次暴发性不明原因肝炎中发现与TTV具有同源性基因片段的病毒。为了解这种新型病毒在不明原因肝炎中的意义及其临床特征，我们对44例缺乏病毒感染标志的肝炎患者血清进行TTV DNA的巢式聚合酶链反应(PCR)检测，并对其中的阳性病例作初步分析。

　　1　材料和方法

　　1.1　研究对象　所有原因不明的急性肝炎病例均为本院1993～1998年5月的住院患者，诊断符合1995年5月北京第五次全国传染病会议修订的病毒性肝炎诊断标准，所有病例均排除5种肝炎病毒(甲～戊)现症感染的可能性(包括血清学和PCR法检查)，同时检测巨细胞病毒、EB病毒抗体及DNA(PCR法)阴性。

　　1.2　病毒DNA片段检测　采用巢式PCR检测TTV。 DNA。DNA提取：血清100 μl以蛋白酶K和十二烷基磺酸钠(SDS)裂解病毒，70℃消化1小时，苯酚、氯仿抽提。PCR反应：按文献报道［5］设计巢式引物：外引物RD037 5′-GCAGCAGCATATGGATATGT-3′，RD

　　038 5′-TGACTGTGCTAAAGCCTCTA-3′；内引物RD051 5′-CATCACCATGAATGCCAGGC-3′，RD052 5′-GTACTTCTTGCTGGTGAAAT-3′。常规加模板、dNTP和Taq酶，按下列参数进行35次PCR循环：94℃45秒，54℃45秒，72℃60秒，最后一次循环72℃420秒；取第二轮PCR产物10 μl，在2%琼脂糖凝胶电脉，出现197bp电泳带为阳性。同时设阳性及阴性对照。

　　2　结果

　　2.1　血清TTV DNA检测结果　经巢式PCR法检测，44例缺乏病毒感染标志的肝炎患者血清中17例经重复检测TTV DNA阳性，阳性率38.6%。

　　2.2　流行病学特征　17例TTV DNA阳性病例中全年均有病例发生；除1例发病前1个月输血1 000 ml外，其他病例均无明确传播途径；12例患者年龄介于21～44岁之间；男女比例9∶8。

　　2.3　临床表现　乏力17/17例(100%)，食欲不振15/17例(88%)，黄疸13/17例(76.5%)，恶心10/17例(59%)，发热9/17例(53%)，上腹不适9/17例(53%)，呕吐6/17例(35.3%)，肝大4/17例(23.5%)。

　　2.4　实验室检查　无合并症患者血清谷氨酸转氨酶(ALT)水平405.56±310.38(17～938)U/L，天冬氨酸转氨酶(AST)270.33±266.73(20～892)U/L，总胆红素水平(TBil)76.75±76.34(12.03～230.9) μmol/L,直接胆红素(DBil)42.74±52.07(4.5～184.3) μmol/L,血清总蛋白水平62.4±18.4(57～76) g/L,白蛋白40.3±3.8(34～44) g/L。1例合并甲状腺机能亢进症患者血清TBil、DBil分别高达760.97、123.6 μmol/L,转氨酶水平为：ALT1110U/L、AST1 142U/L，血清总蛋白/白蛋白为70/30 g/L;另1例合并糖尿病者其胆红素水平也高达TBil 603.44 μmol/L,DBil 183.2 μmol/L。

　　2.5　病理学诊断　在行肝活检术的3例无合并症患者中，病理学诊断均为G1S0，镜下所见：肝细胞轻度肿胀、气球样变，散在灶状坏死，可见凋亡小体，汇管区单个核细胞浸润；1例合并甲状腺机能亢进症者肝组织呈亚急性重症肝炎改变。

　　2.6　预后　15例无合并症患者症状，血清转氨酶及胆红素大多数在1个月左右(18-41天)恢复正常；1例合并糖尿病者病情恶化，自行出院；1例合并甲状腺机能亢进症者治疗无效死亡。

　　3　讨论

　　本文检出的17例TTV感染者中，16例血清转氨酶水平均高于正常值的2倍以上，1例血清ALT、AST正常者胆红素明显升高，且经肝活检证实为急性肝炎，并已排除已知肝炎病毒(甲～戊)感染可能性，尚排除了其他病毒如巨细胞病毒、EB病毒感染，提示这些肝炎患者系TTV感染所致，TTV可能解释部分病原不明肝炎的病因。

　　在TTV DNA阳性的17例患者中，1例发病前1个月有大量输血史，可能经输血感染。日本的报道［5］也显示本病经输血传播。其他16例均无明确传播途径，提示本病可能存在经血液以外的传播途径。国内报道的病人潜伏期粪便TTV高检出率［6］，似乎提示其肠道传染性；胃肠道传播的甲、戊型肝炎病毒有短暂的病毒血症，在病毒血症期间可经血液传播，因而输入本病患者病毒血症期间的血液也可能导致疾病传播［6］。本组病例均为散发，但骆抗先等［6］在一次暴发性不明原因肝炎患者血清和粪便中均发现TTV；发病似多见于青壮年，男女比例无明显差别。

　　临床资料显示本病临床表现与甲、戊型肝炎类似，症状较明显，黄疸常见，但血清转氨酶以中度增高多见，与最近文献报道［6］似不一致。可能的原因是：症状轻微、无黄疸的病人因无明显不适感觉而未就诊。肝组织病理学显示病变以汇管区炎症为主。本病合并甲状腺机能亢进症、糖尿病等慢性消耗性疾病时易加重病情，在本组中前者病理学呈亚急性重症肝炎改变。

　　本病无合并症时预后较好，经综合治疗肝功能一般在1个月左右恢复正常，但因上述病例未随访而无法确定病情是否复发。