为了对新生儿Rh溶血病作出早期诊断，产前诊断和病情的估计有重要的意义。产前诊断内容包括：
①产科和输血病史：要注意妊娠次数，过去有无流产、死胎、胎儿水肿或新生儿黄疸等。第一次妊娠，症状一般都很轻；妊娠次数越多，胎儿或新生儿溶血病就越严重。过去有无输血，即使只输过一次血，第一次妊娠即可发生严重的Rh溶血病。
②血型及抗Rh抗体测定：所有的孕妇初诊检查时都必须作ABO及Rh血型鉴定。如是已被Rh抗原致敏的Rh阴性的孕妇，一般在妊娠16周时首次测定抗Rh抗体的滴定度。若结果阴性，以后每6～8周再重复测定；若结果阳性，则于20周时重复，以后每2～4周复查一次，直至分娩。Rh抗体的滴定度可用盐水凝集试验、胶体介质法、木瓜酶(或其他酶)试验及Coombs间接试验等方法测定。如果孕妇的血清与Rh阳性红细胞及其丈夫的红细胞用盐水凝集试验发生凝集，而与Rh阴性红细胞不发生凝集，表示血清中有完全性抗Rh抗体(IgM)存在。但发生Rh溶血病时，抗体一般为不完全抗体(IgG)，故盐水凝集试验大多阴性，对诊断和病情的估计无多大用处，故必须作胶体介质、酶试验及Coombs间接试验，才能查明抗RhIgG抗体之存在及其滴定度。
③丈夫的检查：须检验孕妇丈夫的ABO、Rh血型及Rh的合子状态(DD还是Dd)。
④羊水检验：临床见A.过去妊娠时曾有胎儿水肿的死胎或严重的新生儿Rh溶血病；B.抗Rh抗体滴定度 ≥1∶16或1∶32情况很可能会使胎儿发生水肿；C.有某些胎儿溶血病可疑的临床表现，特别是胎动减少等情况，需作羊水检验。
通过羊水检验，可以决定哪个胎儿在34～36周即需人工引产以挽救其生命，哪个可以安全地等到足月或接近足月时分娩。羊膜穿刺对孕妇一般没有多大危险，但针刺如果穿过胎盘，由于出血可以加重孕妇的免疫，对胎儿更加有害。穿刺部位一般取腹中线宫底与耻骨联合间中点处，在X线透视和超声检查的帮助下，了解胎儿及胎盘的位置，做好定位，尽量避免损伤胎盘。
正常的羊水无色，发生严重的Rh溶血病时，羊水因含有胆红素变成蜡黄色。羊水中胆红素的含量可用精密的生化方法测定。正常羊水中胆红素浓度低于0.1mg/dl；若增至0.1～0.27mg/dl，提示胎儿可能发生溶血病；超过0.27mg/dl，提示已发生溶血病；高于0.47mg/dl，提示病情严重，若高于0.95mg/dl，即将发生死胎。
(2)新生儿诊断
根据婴儿出生后的临床表现及脐带血检查，对Rh溶血病的严重程度很易作出判断，并需要采取相应的治疗措施。如果脐带血Coombs直接试验阳性，可以排除其他原因引起的新生儿溶血。如果脐带血的血红蛋白＜11～11.5/dl或胆红素＞4.5～5mg/dl，常表示需要立即采取积极的治疗措施。如果婴儿是早产的或曾经窒息，则血红蛋白＜12.5mg/dl 或胆红素＞3.5mg/dl即需采取治疗措施。脐血中若直接胆红素＞2.5mg/dl，常表示严重的溶血病。
婴儿的血红蛋白及血清胆红素须每8～12小时测定一次，以便下一步采取有关的治疗措施。如果胆红素的增高速度每小时超过0.4～0.5mg/dl或在出生后12小时胆红素绝对值达8～12mg/dl，至24小时为12～14mg/dl，至36小时为15～16mg/dl，至48小时为17～18mg/dl或48小时后＞20mg/dl，都是需要立刻采取治疗措施的指征。
