第四节非化酯化脂肪酸测定

第四节　非酯化脂肪酸测定

　　临床上将C₁₀以上的脂肪酸称为游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）或非酯化脂肪酸（nonesterified fatty acid,NFFA），正常血清中含有油酸（18:1,W⁹）占54%，软脂酸（16：0）占34%，硬脂酸（18：0）占6%，是其主要的NFFA。另外还有月桂酸（12：0）、肉豆蔻酸（14：0）和花生四烯酸（20：4，W^{6，9，12，15}）等含量很少的脂肪酸。与其他脂质比较，NFFA在血中浓度很低，其含量水平极易受脂代谢，糖代谢和内分泌机能等因素影响，血中NFFA半寿期为1～2min，极短。血清中的NFFA是与清蛋白结合进行运输，属于极简单的脂蛋白。

　　测定血清NFFA法有滴定法。比色法，原子分光光度法，高压液相层析法和酶法等。一般多以酶法测定。作NFFA测定的标本一定要注意在4℃条件下分离血清并尽快进行测定。因为血中有各种脂肪酶存在，极易也极快使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中NFFA值上升。贮存标本仅限于24h内，若保存三天，其值约升高30%，使结果不准确。

　　1．非酶法测定

　　非酶法测定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高压液相层析法。前三种方法准确性差；高压液相层析法，仪器太昂贵，不便于批量操作。

　　2．酶测定法

　　主要用脂肪酶测定。血清中游离脂肪酸可分别测定酶水解后的产物乙酰CoA或AMP或辅酶A（CoA）进行定量。酶法测定结果准确可靠，快速，易于批量检测。测定原理如图15-6所示。

图15-6 血清主要FFA酶法测定图

　　□：内物质作为生成量与变化量进行测定；ACS：乙酰CoA合成酶；MK：肌激酶；　PK：丙酮酸激酶；POD：丙酮酸氧化酶；DTNB：α-磺基苯甲酸；ACO：乙酰CoA氧化酶；ACD：乙酰CoA脱氢酶。

　　一、光度法

　　1．原理

　　血清中游离脂肪酸经抽提到高密度铜试剂中，形成铜皂在上层溶剂中，再用二苯卡巴肼与铜显色，进行定量。

　　2．试剂组成

+H₂O→100ml调pH至8.1 R-7 二苯卡
巴肼液 二苯卡巴肼（乙醇）液（4g/L）10ml+R-4 0.1ml 临用前配制 R-8 软脂酸标准贮存液 2mmol/L 软脂酸51.2mg溶于100ml R-1液 冷藏 R-9 R-8的应用液 500μmol/L 用R-1液稀释 冷藏

　　3．操作

　　按图15-7操作。

　　4．计算

　　血清游离脂肪酸（μmol/L）=E_SA/E_ST×500

　　二、酶法

　　1．原理

　　血清中游离脂肪酸或非酯化脂肪酸（NEFA），经酶试剂作用生成紫色化合物，其颜色深浅与NEFA含量成正比。

　　2．试剂组成

ATP

4-AAP

溶于10ml R1液中 ≥0.3U/ml

≥1.5U/ml

0.9mmol/L

5.0mmol/L

1.5mmol/L

冷藏5日 R3 酶稀释液  苯氧乙醇

去垢剂 0.3%(V/V) 　 R4 　 马来酰亚胺

该试剂与R3等体积混合 10.6mmol/L 　 R5 酶试剂 乙酰CoA氧化酶

过氧化物酶

TOOS

混合上述试剂，再等体积R4试剂混合 ≥10U/ml

7.5U/ml

0.2mmol/L

冷藏5日 R6 标准液 1mmol/L 冷藏

　　*应用带玻塞离心管

　　3．操作

　　按图15-8操作。

　　4．计算

图15-7 血清非酯化脂肪酸测定(光度法)操作图

图15-8 血清非脂化脂肪酸测定（酶法）操作图

（胡汉宁　储建中）

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