第三节磷脂测定

第三节　磷脂测定

　　磷脂（PL）并非单一的化合物，其分子内含有磷酸基的多种脂质，磷脂是一类物质的总称。血中PL包括：①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%～10%；②磷脂酰乙醇胺等，占2%；③鞘磷脂，占20%。

　　血清PL定量方法包括测定无机磷的化学法和酶法两大类。

　　1．化学测定法过程包括：①抽提分离；②灰化；③显色、比色的三个阶段。

　　2．酶测定法

　　可分别利用磷脂酶A、B、C、D等4种酶作用，加水分解，测定其产物，对PL进行定量。一般多采用磷脂酶D（PL-D）进行定量。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含胆碱的磷脂，这三种磷脂约占血清总磷脂的95%。本法快速准确，便于自动生化分析仪器进行批量检测。

　　一、化学法（消化法）

　　1．原理

　　以有机混合试剂（无水乙醇、乙醇）抽提血清中磷脂，再用浓硫酸和过氯酸消化抽提液中的脂类和其他有机化合物，用硝酸盐与磷反应生成有色化合物，比色定量。本法可用组织细胞磷脂的抽提定量。

　　2．试剂组成

　　3．操作

　　按图15-5操作。

　　4．计算

　　血清脂性磷浓度=E_SA/E_ST×10(mg/dl)

　　血清磷脂（以卵磷脂计）=E_SA/E_ST×10×0.3229(mmol/L)

图15-5 血清磷脂测定（消化法）操作图*采用带塞玻璃试管

　　二、酶法

　　1．原理

　　磷脂酶D因特异性不高，能水解血清中卵磷脂，溶血卵磷脂和神经磷脂（三者占血清总磷脂的95%），释放出胆碱，胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H₂O₂，在过氧化物酶作用下，H₂O₂，4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物，其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比，在500nm波长下比色计算结果为：

　　2．试剂

　　（1）酶应用液（参考配方）：每100ml Tris-His缓冲液（50mmol/L，pH7.8）中含：

　　(2)标准液：纯卵磷脂，临用前配制，5mg/2.5ml蒸馏水（含TritonX-1000.5%）

　　3．操作

　　（1）标本采集：空腹12h抽静脉血，不抗凝，分离血清或抗凝血分离血浆。

　　（2）在3.0ml酶应用液中加入血清（浆）20μl，标准管加标准液20μl，空白管加水20μl，放置37℃水浴10min后，波长500nm，比色，空白管液调零。

　　4．计算

　　血清磷脂（mg/dl）=TA/SA×200

　　血清磷脂（mmol/L）=血清磷脂（mg/dl）×0.01292