检定法
二剂量法
取照上述方法制备的双碟不得少于4个,在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液,其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2：1或4：1。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈的直径（或面积），照生物检定统计法（附录ⅩⅣ）中的（2.2 ）法进行可靠性测验及效价计算。
三剂量法
取照上述方法制备的双碟不得少于6个,在每1双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度(S<[3]>)、中浓度(S<[2]>)及低浓度(S<[1]>)的标准品溶液，其余3个小管分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液;三种浓度的剂距为1∶0.8。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈的直径(或面积)，照生物检定统计法(附录ⅩⅣ)中的(3.3)法进行可靠性测验及效价计算。
本法计算所得效价，如低于估计效价的90％或高于估计效价的110％时,则应调整其估计效价，予以重试。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5％。
表1 抗生素微生物检定试验设计表
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│ │ 培 养 基 │ 灭菌 │抗生素浓度│ 培养条件
抗生素类别 │ 试 验 菌 ├───┬─────┤缓冲液│ 范 围 ├─────┬─────
│ │ 编 │ pH值 │pH值 │ │ 温 度│ 时 间
│ │ 号 │ │ │ 单位/ml │ ℃ │ 小 时
───────┼───────────────┼───┼─────┼───┼─────┼─────┼─────
链霉素 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 0.6～1.6 │ 35～37 │ 14～16
卡那霉素 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 0.9～4.5 │ 35～37 │ 14～16
阿米卡星 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 0.9～4.5 │ 35～37 │ 14～16
巴龙霉素 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 0.9～4.5 │ 35～37 │ 14～16
核糖霉素 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 2.0～12.0│ 35～37 │ 14～16
卷曲霉素 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │10.0～40.0│ 35～37 │ 14～16
磺苄西林 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅰ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │ 5.0～10.0│ 35～37 │ 14～16
去甲万古霉素│枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅷ │ 6.0 │ 6.0 │ 9.0～43.7│ 35～37 │ 14～16
头孢噻肟钠 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501] │ Ⅶ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │ 0.5～2.2 │ 35～37 │ 14～16
庆大霉素 │短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 2.0～12.0│ 35～37 │ 14～16
红霉素 │短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202] │ Ⅰ │ 7.8～8.0 │ 7.8 │ 5.0～20.0│ 35～37 │ 14～16
新霉素 │金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003] │ Ⅱ │ 7.8～8.0 │ 7.8②│ 4.0～25.0│ 35～37 │ 14～16
四环素 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │10.0～40.0│ 35～37 │ 16～18
土霉素 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │10.0～40.0│ 35～37 │ 16～18
美他环素 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │10.0～40.0│ 35～37 │ 16～18
金霉素 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │ 4.0～25.0│ 35～37 │ 16～18
多西环素 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │ 4.0～25.0│ 35～37 │ 16～18
氯霉素 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │30.0～80.0│ 35～37 │ 16～18
杆菌肽 │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001] │ Ⅱ │ 6.5～6.6 │ 6.0 │ 2.0～12.0│ 35～37 │ 16～18
粘菌素 │大肠杆菌[CMCC(B) 44103] │ Ⅵ │ 7.2～7.4 │ 6.0 │ 614～2344│ 35～37 │ 16～18
两性霉素B ①│啤酒酵母菌 (9763) │ Ⅳ │ 6.0～6.2 │10.5 │ 0.5～2.0 │ 35～37 │ 24～36
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① 两性霉素B双碟的制备，用菌层15ml代替两层。
② 含3％氯化钠。
表2 抗生素标准品品种与理论值
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┃ 标准品品种 │ 标准品分子式或品名 │理论计算值 u/mg ┃
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┃链霉素 │(C21H39N7O12)2·3H2SO4 │ 798 ┃
┃卡那霉素 │C18H36N4O11·H2SO4 │ 831.6 ┃
┃阿米卡星 │C22H43N5O13 │ 1000 ┃
┃核糖霉素 │C17H34N4O10·nH2SO4(n<2) │ ┃
┃新霉素 │硫酸新霉素 │ ┃
┃庆大霉素 │硫酸庆大霉素 │ ┃
