分子生物学复习题

卫星DNA：

b         重复顺序：由2-10bp组成重复单位，重复单位成串排列而成

b         由于类序列的碱基组成不同于其他部份，可用等密度梯度离心法将其与主体DNA 分开，因而称为卫星DNA （或随体DNA）

b         在人细胞组中，卫星 DNA约占 5-6％

b         按其浮力密度不同，人的卫星DNA可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种　

ALU家族：Alu家族每个成员的长度约300bp，每个单位长度中有一个限制性内切酶Alu的切点（AG↓CT），Alu可将其切成长130和170bp的两段。

ALU是中度重复序列的，具有种特异性，可用于区分不同的哺乳细胞，不同的Alu成员的侧翼重复顺序各不相同，在相近的生物体中Alu家族在结构上存在相似性人类 Alu 序列的第二个单体的插入序列相似但是不相同。它广泛分布与人和哺乳动物的基因组中，是哺乳动物基因组中含量最丰富的一种中度重复顺序家族，在人基因组中重复达30万-50万次。

基因克隆:应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或易源的，原核的或者真核的，天然的或者人工的DNA）与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子－复制子（replicon），继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进修扩增提取获得大量同一DNA分子，也称重组DNA技术。

蛋白聚糖：是糖类与蛋白质的复合物，主要由糖胺聚糖和核心蛋白两部分组成，这两部分在数量核结构上均可以出现差异，导致蛋白聚糖种类繁多，分布广泛。聚糖链与多肽链共价连接，分子中的含糖量一般为50%-90%，蛋白聚糖分子中的常见糖基有GlcN、GalN GlcNAc、GalNAc，GlcUA、IdoUA， 硫酸化， 其它等。      

第二信使：通常将Ca2+ 、DAG、IP3、cAMP  、 cGMP等这类在细胞内传递信息的小分子化合物称为第二信使 。

G蛋白：是一类能和GDP或GTP结合、位于细胞膜胞浆面的蛋白质，可分为GS（活化型）,

Gi（抑制型），磷脂酶C型G蛋白，视觉传导G蛋白，小G蛋白等。G蛋白位于质膜上，具有7α跨膜螺旋结构通常由三个亚基组成α、β、γ，α亚基与GDP结合时，G蛋白没有GTP酶活性，α亚基与GTP结合时，α亚基与、γ亚基分离，α亚基有GTP酶活性。

TPK: 酪氨酸蛋白激酶，是一类催化ATP之γ－磷酸转移到蛋白质酪氨酸残基上的激酶，分为两类：一 受体型TPK,是位于质膜上的受体，也具有酪氨酸激酶的活性，比如：胰岛素受体，表皮生长因子受体。二非受体型TPK，位于胞质中，它们与质膜的受体偶联发挥作用。

RT-PCR: 用提取的mRNA或总RNA(含mRNA)为模板，反转录和扩增cDNA。它是检测特定基因表达水平的主要方法之一，也是用于鉴别，诊断RNA病毒的重要技术。

Southern 印迹:系将DNA经限制性酶切，凝胶电泳后，再转移至膜上与标记探针杂交的一种核酸分子杂交技术。特异性，敏感性，准确性具佳。主要用于检测基因组中特定的基因和序列，也常用于鉴定克隆DNA的特殊序列。

实时PCR: 是最好的分析mRNA的方法，基本原理是通过荧光染料标记后获得荧光强度就可以计算模板DNA或者是mRNA的含量。与传统的PCR相比有两个优点：

一   可以再PCR扩增进展过程中监测每一个循环后的PCR产物的积累情况，而且对产物进行自动的量化分析；而传统的PCR需要手动收集几个时间点的样品进行定量分析。

二   扩增完后不需要将PCR产物从管中取出，可以减少污染的机会，降低假阳性结果；而传统PCR产物需要凝胶电泳。

PCR-SSCP：是一种基于DNA单链构象多态性的基因诊断技术，原理：首先利用PCR扩增目的DNA，然后将扩增产物进行非变性 PAGE，可测定DNA碱基序列有无变异，具有简便，快速，灵敏的优点，易于大量样本的筛选，可以检测，诊断突变基因的有无。

问答题

1蛋白质的超二级结构与结构域的异同？

蛋白质的超二级结构是指多肽链内顺序上互相靠近的二级结构单元在空间上进一步靠近，彼此相互作用，形成有规则的二级结构聚集体。目前发现的超二级结构有三种形式：aa、bab、bbb，超二级结构的形成主要是组成他们的氨基酸残基侧链基团相互作用的结果。

超二级结构可形成紧密、稳定而且在蛋白质分子构象上明显可分的区域，称为结构域，而结构域之间的肽链松散、弯曲，形成分子内裂隙结构，这种结构常常是蛋白质活性中心和变构中心所在处，他有利于酶和底物结合并产生应力，也有利于与调节物的结合，产生变构效应。结构域一般由序列种连续的40～400个氨基酸组成，他们分别担负蛋白质分子不同的功能，因此又称为功能域。

2糖蛋白分子中糖链的主要连接方式？

一  O-连接型：糖在多肽链上的连接点是:  Ser 、 Thr 、 Hyp 、 Hyl残基上的-OH ，有以下几种：

(1)O-GalNAc α1-Ser/Thr

(2)O-GlcNAc α1-Ser/Thr(单糖.多点.转录因子)

(3)O-Fuc    β1-Ser/Thr(表皮生长因子样蛋白)

(4)O-Xyl    β1-Ser (人甲状腺球蛋白)

(5)O-Hyl    Galβ1-Hyl (单糖/二糖.仅见于胶原蛋白)

(6)O-Hyp    Araβ1-Hyp (植物/海藻.动物中未发现)

二N-连接型：多肽链上的连接点:  Asnγ位的酰胺N原子，分为：

(1)N-GlcNAc（β1位羟基）  ，(2)N-GalNAc罕见,只见于嗜盐菌细胞表面  (3)N-Glc

理化性质：亲水，多羟基，硫酸根，凝胶，负电荷

3 两例糖蛋白与医学的关系？

一 与肿瘤的关系：研究发现,恶性肿瘤细胞糖蛋白的聚糖链有明显改变，主要变化是N-GlcNAc连接型聚糖链出现：1.天线数增加，2.聚乳糖胺结构出现或增加(Gal β1→4GlcNAc β1→3)n，3.核心岩藻糖增加，4.出现偏二天线结构 。

二与自身免疫性疾病的关系：免疫球蛋白IgG是糖蛋白.

★类风湿病:

血清IgG的N-聚糖链末端Gal下降,而GlcNAc增加导致IgG → IgG0，IgG0作为自身抗原刺激机体产生自身抗体导致类风湿关节炎的发生。

4糖胺聚糖结构特点，理化性质？

糖胺聚糖(GAG)是蛋白聚糖分子中的主要成分,典型结构特点是：具有由氨基己糖与己糖醛酸或半乳糖交替排列形成的二糖重复单位。氨基己醣为GlcN和GalN，己糖醛酸为GlcUA和IdoUA;上述糖基常常被硫酸化修饰。

GAG可分为：

1.     透明质酸

2.     硫酸软骨素/硫酸皮肤素

3.     硫酸角质素

4.     肝素/硫酸乙酰肝素

5举例说明受体类型？

按照部位分为 膜受体与胞内受体，按照结构和功能又可分为：环状受体等类型。

一   膜受体

1环状受体：即配体依赖性离子通道，受体配体结合激活离子通道。比如乙酰胆碱受体。

2七个跨膜α螺旋受体：胞浆面第三个环能与鸟苷酸结合蛋白相偶联的受体，比如：磷脂酶C型G蛋白

3单个跨膜α螺旋受体：A.酪氨酸蛋白激酶受体型，本身具有酪氨酸激酶的活性，比如：胰岛素受体，表皮生长因子受体。 B.非酪氨酸蛋白激酶受体型,本身无酪氨酸激酶的活性，但是可以偶联胞质中的酪氨酸蛋白激酶发挥作用，比如：生长激素受体 ，干扰素受体。

二  胞内受体

1胞浆受体：受体在胞浆中，与激素结合后将激素转移到核内发挥作用，比如：糖皮质激素受体。

2核受体 ：受体在细胞核中，与相应的受体结合可开放和关闭基因的转录因子，比如：甲状腺激素受体。

6 细胞间信息作用的方式？

旁分泌----信息分子仅通过组织液扩散作用于临近的细胞，比如：生长抑素
内分泌----信息分子经血液运输到组织发挥作用，比如：激素
突触分泌----神经细胞释放神经递质的方式，比如：乙酰胆碱的释放
自分泌----内分泌细胞分泌的物质作用于自身，比如：癌蛋白
7 Ca离子信息传递作用？

1 Ca离子激活激活Ca2+-磷脂依赖性蛋白激酶途径，Ca2+作为第二信息可促进DAG激活PKC。

2 Ca离子激活Ca2+-CaM依赖性蛋白激酶途径，Ca2+与CaM结合使CaM构象改变，可以激活

CaM－PK，后者诱导丝/苏氨酸残基磷酸化。

8 AC与GC的相似性与差异？

相似点：都是位于细胞膜上的蛋白质；都有激酶的特性，产生第二信使，参与细胞间信息的传递。

不同点：在结构上AC是多个跨膜的α螺旋，而GC是单个跨膜的α螺旋；AC 产生的第二信使是cAMP, GC 则是cGMP；GC在膜靠细胞外有配体结合域，结构类似与酪氨酸蛋白激酶，既是膜受体，同时又具有蛋白激酶的活性，而AC没有膜靠细胞外的配体结合域，只有催化结构域的催化作用。

9 简述染色体的一二三级包装？

一级包装  核小体的形成：由直径2nm的DNA双螺旋链绕组蛋白形成直径11nm 的核小体 “串珠” 结构，其长度压缩了6-7倍。

二级包装  螺线管纤维的形成：由6个核小体盘绕形成一种中空螺线管，螺线管的形成使DNA又压缩6倍。

三级包装  环状螺线管的形成：由螺线管纤维缠绕在一个由某些非组蛋白构成的中心轴骨架上形成，这使螺线管纤维得到了较大程度的压缩。

10 假基因及其特点

在多基因家族中，无功能的基因称为假基因，假基因是一段重复的DNA序列，与功能基因同源，其功能的丧失可能是由突变造成的。它来源的一种猜测是：RNA前体通过剪接失去内含子形成mRNA，后者经反转录产生cDNA，再整合到染色体DNA 中去，便有可能成为假基因。

11 基因克隆常用的工具酶？

限制性核酸内切酶，DNA聚合酶I ，逆转录酶，T4DNA连接酶，碱性磷酸酶，末端转移酶。

12 基因克隆载体选择标准？

1能自主复制；2具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定；3有克隆位点，常具有多个单一酶切位点（多克隆位点）；4分子量小，以容纳较大的外源DNA。

13  2型限制性DNA内切酶作用特点，适用注意事项？（变态）

作用特点：

1各种酶识别的DNA序列具有特异性，被识别的序列常有回文结构，酶解后5’-带磷酸，3’-带羟基

2切口特征有三种：平端切口，5’突出的黏性末端，3’突出的黏性末端

3用同一种限制性内切酶水解两种不同的DNA分子，可产生相同的黏性末端

注意事项：

1于－20℃保存，酶取出后仅短时间置于冰浴中，用后立即放回－20℃保存

2 操作时一般使讲其他试计加完后，最后加酶。

3 为防止酶氧化，缓冲液中加入DTT或硫基乙醇，DNA中不能含有机溶剂，EDTA，盐等杂质，否则会影响酶的活性。

4 防止星号活力。

14      比较DNA限制性内切核酸酶谱分析和限制性长度多态性分析？（变态）

限制性内切酶酶谱分析是使用不同的限制性内切酶对同一个DNA分子进行酶切，将所得的片段进行分析以确定酶切位点的相对位置，NDA序列不同，其酶切图也不同，比如重组子与空载体酶切图不同，可用于基因克隆、分离和基因功能研究。

RFLP分析是集限制性内切酶、核酸电泳、印迹技术、探针杂交等技术于一体的综合应用，其常用于临床遗传性疾病的基因诊断和生物群体的遗传分析，其原理如下：由于DNA分子中核苷酸排列顺序的多态性（变异或不同物种），限制性核酸内切酶在切割DNA分子时，所得DNA片段的长度分布也是千变万化的。这种酶切片段长度分布的多样性分析就称为限制性片段长度多态性(RFLP)分析。

15  Taq DNA 聚合酶的功能和特点？

一种耐热的DNA依赖性的DNA聚合酶，最适作用温度为75－80℃，具有依赖聚合作用的5’－ 3‘外切核酸酶活性，用于PCR,对DNA分子的特定序列进行体外扩增，也可以用于DNA测序。

16  基因治疗的基本方法？

(一)基因矫正：指将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留。
(二)基因置换：就是将致病基因整个地换以正常基因，使致病基因永久地得到更正。

(三)基因增补：指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物饰变缺陷细胞的功能或使原有的功能特别加强。

(四)基因失活：就是应用反义技术特异封闭某些基因，以达到抑制某些有害基因的表达。

17  基因诊断技术与其它诊断技术相比有哪些特点？

基因诊断是直接从DNA/RNA水平检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的诊断技术。 与传统的诊断技术相比有：早期诊断；特异性强；针对性强；灵敏度高；适用性强的优点。

首先，基因诊断可用于研究基因差异表达，对有组织和分化阶段特异性表达的基因进行检测；其次，基因诊断不仅可对某些疾病作出准确检测，还能对疾病的易感性、发病类型和阶段、感染性疾病以及疾病抗药性作出判断；最后，基因诊断还可快速检测不易在体外培养（如爱滋病病毒、各种肝炎病毒等）和不能在实验室安全培养的病原体，并可采用DNA长度片段多态性分析，对病原体进行基因分型。

基因诊断已经广泛应用于病毒，寄生虫诊断，亲子鉴定等方面。

18      简述核酶技术和RNA干扰技术在临床方面的应用前景？

核酶：经典的核酶是具有自我剪切功能的RNA分子，应用核酶的自我剪切功能阻断有害基因的表达称为核酶技术，它直接破坏遗传信息流，靶向作用于mRNA，特别是在治疗因RNA异常表达所致的疾病有很大的前景，多种癌症模型显示，核酶优于反义寡核苷酸治疗，现在核酶技术已经广泛应用于病毒，癌症的基因治疗。另外，脱氧核酶也具有剪切RNA的特点。

RNAi是指生物体内利用dsRNA诱导同源靶基因的mRNA特异性降解，从而导致转录后基因沉默的现象．近年来，RNAi技术在医学研究中的广泛应用均取得了显著的基因沉默效果，RNAi以其高特异性、高效性等显著优势将在功能基因组，生物医学等方面具有广阔的前景，但是

并不是所有的病毒都发生沉默，以及其它问题。