腺病毒载体转染p53基因提高肿瘤放射敏感性的实验研究进展 2

放射抗拒的头颈鳞癌细胞系 jSQ-3的放射敏感性，这种效应具有时间和重组病毒感染剂量依赖性，1次20感染复数（ multiplicity of infection， mOI）的 avlp53感染后36小时放射增敏效应最大。头颈鳞癌细胞系 jSQ-3接种裸鼠，待种植肿瘤体积长至12mm3时，一次性注射2.5×108～1.5×109噬菌斑形成单位（ phagemid formation unit， pFU）的 avlp53，36～48小时后开始照射γ线2．5Gy，隔天1次，总剂量20Gy，实验组开始照射后42天至65天肿瘤全部消失，观察5个月未见复发，而单纯 avlp53局部注射组肿瘤持续生长或缩小至50％后又生长，单纯照射后早期肿瘤缩小，但照射5周后又复发；病理切片也显示 p53加照射组肿瘤放射反应明显重于单纯照射组或单纯基因转染组。

　　xu等［19］利用转铁蛋白脂质体转染 wtp53，发现被转染的细胞内有大量的 p53蛋白表达，并能消除细胞内 mtp53效应，提高放射抗拒性 jSQ-3细胞放射敏感性，1×105细胞内导入3μ g质粒可以把 d10（使细胞存活率下降到10％所需的剂量）由（6．36±0．54） gy降至（4．13±0．06） gy， p＜0．01，接近于放射敏感的纤维母细胞系 h500细胞，其 d10为（4．5±0．05） gy。

　　gallardo等［20］着重研究了 p53基因缺失的卵巢癌细胞系接受腺病毒（ aden-ovirus， adV）介导 wtp53基因转染后的放射敏感性改变。体外实验发现 mOI为10∶1的 adVp53感染48小时后，几乎所有细胞均表达 p53蛋白，每隔48小时计数细胞，7天后转染 wtp53的细胞仅约为对照组的1／3，说明 wtp53转染有一定的抑制肿瘤细胞生长作用；照射2Gy或4Gy后发现转染 wtp53的细胞放射敏感性明显高于对照组（ p＜0．05)。体内实验用5×106SK-OV-3细胞接种 sCID小鼠，4周后肿瘤直径长至0．5～0．6cm时，实验组和对照组分别注射1×108PFU的 adVp53和 adVLacZ，注射3天后，免疫组化 p53蛋白染色说明 p53转染至50％的肿瘤细胞，照射采用60Co，24Gy，6次，结果发现单纯照射组和单纯 adVp53转染组肿瘤生长曲线相似，均比 adVLacZ组和生理盐水组生长缓慢，但没有长期控制， adVp53加照射组45％肿瘤得以控制，观察50天后无肿瘤复发。

　　总之，基因治疗是现代医学的研究热点，有可能在一定程度上改变人类疾病治疗的历史进程，但目前的基因治疗尚处于婴儿期，在目的基因有效性、基因转移系统的可控性和靶向性方面还存在许多问题，短期内难以在临床上单独发挥作用，研究与基因治疗有关的综合治疗是一件有意义的工作。