动物源性内脏利什曼病(ZVL)是重要的寄生虫病之一。该病在中美、南欧、北非、东西非的下撒哈拉地区,西南亚和中国流行。特别是罹及小儿和免疫缺陷的成人。其家畜保虫宿主主要是犬,森林中的保虫宿主为犬科动物。在此病存在的地区,感染的野生动物进入农家掠食家禽时,寄生虫进入居家流行环。此时,庭院附近的白蛉因吸食野生动物血而感染,尔后白蛉将病原传染家犬,形成人附近的犬—昆虫—犬传播环。如感染的白蛉叮咬人,人即获感染[1]。现将犬利什曼病的流行、诊断和防制综述如下。
1 犬利什曼病的流行
在意大利北部维亚艾米利亚地区曾有黑热病爆发,1971~1972年共发现60例利什曼病患者,其中58例发生在丘陵地带。Pampiglione等(1974)[2]对无症状的8 454只犬作补体结合试验,阳性率为1.6%。当地有Phlebotomus perfiliewi存在。在法国南部的马赛和尼斯等地有较多的黑热病病人。AL-Zahrani等(1988)[3]检测了分布在沙特阿拉伯两个利什曼病人高发区的野狗群。将捕获的89只野狗杀死,取肝脾组织做成印片,镜检发现6只(6.7%)犬有利什曼原虫。Evans等(1990)[4]在巴西东北部受检的405条犬中IFA血清法检出阳性69例(17%),而在当时,家犬是杜氏利什曼原虫恰氏亚种的主要保虫宿主。在以色列中部地区毗邻大都市的村庄中有内脏利什曼病的流行。Benath等(1998)[5]以粗制利什曼原虫抗原为诊断抗原的ELISA结果显示:已有病例报告的两个村庄受检的122只家犬,14只阳性(11.5%),邻近5个村庄受检的99只家犬,1只阳性(1.0%)。其中12只犬经活检后培养出利什曼原虫前鞭毛体,经CP-PCR(ciamped polymorphic-PCR),单克隆抗体证实为婴儿利什曼原虫。
犬感染利什曼原虫后主要症状有淋巴结肿大,眼、鼻周围糠状皮炎,皮毛无光泽和脱落,鼻出血,角膜结膜炎,趾甲弯曲,体重明显下降,肝脾肿大,在许多组织内包括皮肤均可发现原虫。在欧洲的犬利什曼病疫点,50%以上阳性犬无症状,但这类犬和有症状的一样能感染白蛉[6]。Dye(1988)[7]根据法国南部犬内脏利什曼病传播的生物学资料,建立了一个分室模型,该模型有两个特点:①能预测白蛉密度的阈值,低于此阈值,传播将被阻断;②当白蛉高密度时,犬内脏利什曼病患病率最大值应作为未知量来考虑。
在我国陇南、川北的黑热病高发区内,犬内脏利什曼病的患病率历来甚高,属于犬源性内脏利什曼病流行区。1985年,甘肃省地方病防治所在文县抽查4个发病乡6个自然村的家犬90只,经骨髓穿刺查出病犬15只(16.7%),其中有1个自然村共养7只犬,在抽查的5只犬中有4只是病犬。1986年,在文县另一流行村灭犬过程中,随意查犬4只,全部阳性。1987年,又在礼县的两个流行村内查犬26只,检出带有利什曼原虫的病犬6只(23.1%)[8]。王秀珍等(1991)[9]用快速ELISA法检测了采自四川省汶川县黑热病重流行区的124份犬血清,查出阳性犬39只,占31.45%。王子龙等(1991)[10]用利什曼原虫kDNA印迹杂交法对采自甘肃省文县黑热病流行区的30只家犬耳缘皮肤组织印迹样品进行杂交试验。结果有8份呈阳性反应(26.7%)。由此可以认为这些流行区的犬利什曼病相当普遍。
2 犬利什曼病的诊断
2.1 骨髓穿刺涂片法
此法最大的优点是以查出病原体为诊断依据,故准确性高,但取骨髓及检查过程均较为繁杂,且耗费大量人力、物力[8]。近年常将此方法作为其他实验检测手段的对照[9,10]。
2.2 检测血清抗体
2.2.1 较早用于检测病犬血清抗体的方法有补体结合试验(CFT)[2,11],间接血凝试验(IHAT)[12]和对流免疫电泳(CIEP)[12]。这些方法敏感性和特异性均不够高,现已很少采用。
2.2.2 间接免疫荧光抗体试验(IFAT) Francesca等(1988)[12]用88只犬的血清作IFAT。结果,A、B、C三组的敏感性均为100%。D、E两组的特异性也均为100%。Evans等(1990)[4]在巴西东北部调查了405只犬,取其血样本作IFAT。结果,滤纸干血清法为8%的阳性率,用血清则为17%的阳性率。IFAT虽然敏感性和特异性均较高,但仪器昂贵,不适合基层推广应用。
2.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA) Srivastava等(1984)[13]在印度西北部用滤纸采血采集了325份犬血样本,并且同时收集血清,将血清和滤纸血作ELISA。结果,6只犬呈阳性反应,而病原学检查皆呈阴性反应。Evans等(1990)[4]在巴西东北部取405只犬血样本作ELISA,阳性率为38%。而且,所有病原学检查阳性的标本,ELISA检测均阳性。王秀珍等(1991)[9]用快速ELISA法检测了汶川县黑热病重流行区的124份犬血清,阳性率为31.45%,而骨髓涂片法的阳性率为19.35%。对47份采自非流行区的正常犬血清,只有1例呈假阳性反应,占2.13%。用快速ELISA法检测实验感染了旋毛虫、肺吸虫、钩虫、弓形虫等犬血清共26份,均未见交叉反应。说明ELISA的敏感性和特异性均较高。
2.3 检测血清循环抗原
胡孝素等(1991)[14]用单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法对四川省汶川县125只犬进行感染利什曼原虫调查,骨髓涂片法查出原虫的阳性犬46只,感染率为36.8%。而McAb-AST的结果与骨髓涂片阳性符合率为97.8%,总符合率95.2%。王雅静等(1991)[15]用McAb-AST检测采自甘肃省文县的30份犬血清循环抗原,阳性率为30%,与骨髓穿刺涂片法的总符合率为86.7%。同时检测50只非流行区犬血清,只有1只出现阳性反应(2%)。来自7只自然感染犬弓蛔虫幼犬血清及12只实验感染斯氏狸殖吸虫的犬血清中,McAb-AST试验皆呈阴性反应。王雅静等(1993)[16]将McAb-AST用于检测10只实验感染杜氏利什曼原虫的小犬血清循环抗原,感染后5天即出现阳性反应,并随着时间的加长,阳性反应程度也有加强。初步建立了犬利什曼病的早期诊断方法。McAb-AST具有较高敏感性和特异性,所需样品量微(2μl),并且可用于早期诊断。
2.4 聚合酶链反应技术(PCR)
杨文天等(1993)[17]将其自己设计的一对寡核苷酸引物Ⅰ和Ⅱ以及文献报导的一对引物A、B,用PCR法检测12只人工感染杜氏利什曼原虫的犬骨髓组织样品,7例呈阳性反应,骨髓涂片法8例查见原虫。Ashford等(1995)[18]用PCR方法对25只用