4 HSEC分泌一氧化氮和内皮素及其对肝微循环的调节作用
肝血窦的血流量很大,其血流变化对门脉压力的形成有一定的影响。肝血窦内的血流变化与狄氏隙内的贮脂细胞(又称星状细胞或Ito细胞)相关[17]。肝贮脂细胞也是一种肌成纤维细胞,它主要受HSEC分泌的一氧化氮(NO)和内皮素(ET)的作用而发生变化。ET是一种强有力的血管活性物质(21个氨基酸多肽),有ET-1、ET-2和ET-3三种同工型。ET主要由内皮细胞产生,通过旁泌作用于邻近的细胞和平滑肌细胞、周细胞和肝贮脂细胞,也可能自泌作用于自身,ET的主要功能是调控局部血管张力,但有人认为ET对生长和发育也有广泛的影响[19]。ET有两种类型的受体即ETRA和ETRB,它们均通过细胞内G-蛋白传递细胞外信号[20]。ETRA主要位于血管平滑肌细胞表面,它与ET-1的亲合力最强,约是与ET-3亲合力的100倍。ET与其受体结合介导血管平滑肌的收缩。ETRB与ET结合后产生的效应主要决定于细胞类型,如ET与内皮细胞自身的ETRB结合,可引起NO的释放及血管平滑肌松弛;若ET与血管平滑肌细胞上的ETRB结合,则可诱导平滑肌的收缩[21]。大鼠肝贮脂细胞表面的ET受体量远高于内皮细胞、Kupffer细胞和肝细胞等,若用ET-1灌注肝,可引起肝血窦收缩,光镜和电镜放射自显影术研究发现,ET-1主要与贮脂细胞结合。另外,用核酸杂交和竞争结合分析研究也证明[22],贮脂细胞既表达ETRA又表达ETRB,ETRB还与细胞的生长分化调节有关。应用高能活体显影观察证实[17],贮脂细胞表面丰富的ETRA与ET结合可致细胞发生很强的收缩作用。P物质、去甲肾上腺素与和血栓素等也能引起贮脂细胞的收缩,但作用较ET弱。
内皮细胞源性NO是一种血管舒张因子,它是在一氧化氮合酶(NOS)的作用下由L-精氨酸和氧分子结合而生成的。NOS有二种同工异构型:组织型NOS(原生OS,cNOS)和诱那里型NOS(iNOS)。cNOS依赖钙-钙调蛋白系统,产生的NO较少,参与细胞正常生理状况下的机能调节;iNOS在正常状况下不表达,也不依赖钙-钙调蛋白系统,在内毒素和某些因子刺激下才表达,产生大量的NO。可能由于内毒素和细胞因子影响核因子Kb/rd活性,后者激活iNOs基因的转录,从而使细胞产生大量NO[23]。
近来研究发现[24],内皮细胞分泌NO又对自身的NOS的合成产生负调节效应。NO半衰期极短,仅30秒。NO可弥散入血管平滑肌细胞内,通过与细胞内Ca2+的结合,激活可溶性cAMP,使平滑肌松弛,血管舒张。肝贮脂细胞体外培养研究表明,外源性NO能阻止ET-1诱导贮脂细胞收缩;无论在含有或不含有内毒素或细胞因子的条件,贮脂细胞也产生NO,并以自泌方式作用于自身。
我们实验室的研究表明[25],正常大鼠HSEC强烈表达ET-1,在肝纤维增生性病变时,HSEC表达ET-1明显减弱;用原位杂交和免疫组化法从核酸水平和蛋白水平的研究均证实,正常大鼠HSEC表达cNOS,产生少量NO,而在肝纤维化时,iNOS表达增强,NO的产生明显增多,这可能与肝病理状况下产生的一些因子作用于HSEC有关。
由此推测,正常HSEC生成的NO和ET-1,两者通过旁泌作用于邻近的贮脂细胞,调节和稳定肝微循环血流,在肝纤维化时HSEC合成ET减少,而NO的产生相应增多,使血窦扩张,进而改善肝纤维增生时肝血循环障碍。也有实验看到,给肝纤维化大鼠门静脉灌注NOS底物L-精氨酸,可降低门静脉对去甲肾上腺素的敏感性。表明肝内产生的NO有一定的降门脉高压作用[26]。由此可见,HSEC产生的ET和NO既有稳定正常肝微循环的作用,又与肝纤维化等病变的发生发展相关,尤与门静脉高压的形成有关。若将ETRA拮抗剂Bosentan灌注给肝纤维化并伴有门脉高压的大鼠,可降低门静脉压力,目前这一复合物已用于临床治疗[27]。倘若能有效控制肝内ET和NO的合成及其作用,可能有利于改善门脉高压。
5 HSEC表面受体和粘附分子的表达
HSEC的表型及其相应的生物学特性与其他内皮细胞有一定的差异。HSEC表达其他内皮细胞不表达某些受体如IgG的Fc受体、CD13、CD14等以及一些粘附分子如ICAM-1、CD4、α5β1、α1β1。HSEC不表达其他血管内皮细胞表达的分子,如C62、CD31、CD34等。这可能与HSEC所处的微环境有关[28-34]。
5.1 HSEC清除作用的相关受体表达
IgG的Fc段受体:实验研究证明,除胎盘血管内皮及肝HSEC表达IgG的Fc受体(FcR)外,其他正常血管内皮细胞均不表达FcR。IgG的FcR可分为FcRⅠ、FcRⅡ(CDw32)FcRⅢ(CD16)三种。HSEC仅表达FcRⅡ和FcRⅢ两种受体。我们以EA花环实验研究发现[28],HSEC表达的FcR活性,在相应抗体介导下可与羊红细胞形成花环。应用FcR单克隆抗体及胶体金标记羊抗鼠IgG的电镜免疫组化法,可见HSEC表面与枯否细胞一样有数量不等的胶体金颗粒,更明确证实HSEC表达FcR;在HSEC内吞泡内也可见胶体金颗粒,提示FcR与免疫复合物结合并内吞入胞质内[25]。有研究认为,HSEC主要摄取血循环中可溶性免疫复合物,在溶酶体内被降解消化,但至今尚无直接证据表明HSEC有抗原递呈作用。在多数情况下,肝血窦中枯否细胞呈MHC-Ⅱ阳性,而且均表达HLA-DR和HLA-DQ,但很少看到HSEC具有HLA-DR活性,而HLA-DR在抗原递呈中起重要作用。因此,正常情况下的HSEC可能不具有抗原递呈作用,但不排除病理情况下被诱导而具有抗原递呈作用。
<