第二节甘油三酯测定

第二节　甘油三酯测定

　　甘油三酯又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相应称为甘油三酯（TG）、甘油二酯（DG）和甘油一酯（MG）。血清中90%～95%是TG，TG中结合的脂肪酸分别为油酸（44%）、软脂酸（26%）、亚油酸（16%）和棕榈油酸（7%）。

　　血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。

　　血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精（软脂精）（分子量807.3）、三油精（分子量895.4）为标准，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。

　　1．化学法

　　化学测定法包括：①TG的抽提分离；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲掌显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，本法准确性差，一般很少用。

　　2．酶法测定

　　酶法测定包括：①TG的抽提与皂化；②加水分解生成甘油糖定量等二个阶段。常规检测应用的方法有甘油激酶（glycerol kinase,GK）法和甘油氧化酶（glycerol Oxidase,GOD）法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。

　　一、乙酰丙酮法

　　1．原理

　　血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。

　　2．试剂组成

2mg+R-1→100ml（TG100mg/dl）

　　3．操作

　　按图15-3操作。

图15-3 血清甘油三酯（乙酯丙酮法）测定操作图

　　4．计算

　　血清TG浓度=E_SA/E_ST×1.13(mmol/L)

　　二、酶法（GK-GPO-POD比色法）

　　血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶（GK）及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，尔后，在磷酸甘油氧化酶（GPO）作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H₂O₂，H₂O₂与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶（POD）作用下，生成红色亚醌化合物（quinoneimine），比色（500nm），其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。

　　（一）手工测定法

　　1．试剂组成

　　*：一般采用商品试剂盒

图15-4 血清甘油三酯测定法（酶法）操作图

　　2．操作

　　按图15-4操作。

　　3．计算

　　血清TG浓度=E_SA/E_ST×2.26(mmol/L)

　　（二）生化分析仪检测

　　全自动生化分析仪测定操作（以CL-7200型为例）。

　　1．试剂

　　A液：GK，GPO，4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。

　　B液：POD，Lipase,ESPAS等。　

　　标准液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

　　2．上机参数

　　3．操作过程

　　4．计算

　　以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算，自动打印结果。

　　5．注意事项

　　①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。

　　②试剂在有效期内2～8℃避光保存。

　　③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。