吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程

吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程

　　本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸附制成。用于预防破伤风。

　　1 毒素制造

　　制造破伤风毒素应在隔离的具有专用消毒设备的实验室内进行。实验室的墙面、地面及实验台应使用便于消毒的材料。工作人员应经过培训并接受破伤风类毒素全程免疫，以后每10年进行一次加强免疫，凡发生外伤未完全治愈前不能参加工作。

　　1.1 菌种

　　1.1.1 应选用中国药品生物制品检定所分发或同意的产毒效价高、免疫力强的破伤风菌株，必要时可对菌种进行筛选。

　　1.1.2菌种应定期作全面性状检查（如细菌形态、纯菌试验、糖发酵反应、产毒试验及特异性中和试验等），并有完整的传代、检定记录。

　　1.1.3菌种应用冻干或其他适宜方法保存在2～8℃。

　　1.2 培养基

　　制造种子管及毒素培养基所用的酪蛋白、黄豆蛋白、牛肉等蛋白质应适当加深水解。其他原材料应尽量减少对人体产生过敏反应的物质，不得含有可引起人体毒性反应的物质。培养基原材料应保证质量，所用化学原料应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》。

　　1.3 毒素

　　1.3.1 毒素制造过程应严格控制杂菌污染，经显微镜检查或纯菌试验发现污染者应废弃。

　　1.3.2 毒素须经除菌过滤后方可进行下步制造程序，亦可杀菌后进行精制。

　　1.3.3 毒素Lf测定

　　用生理盐水将Lf 检定用标准破伤风抗毒素稀释至100Lf/ml，按一定间隔递增量加于一列絮状检定用试管中，每管加待检毒素1ml，摇匀后立即放入50℃水浴中，以首先出现絮状者判定毒素的Lf值，并记录絮状反应时间。

　　1.3.4用于生产的毒素不得低于40Lf/ml。

　　2 类毒素制造

　　2.1 毒素或精制毒素的脱毒

　　毒素或精制毒素中加入适量甲醛溶液，置适宜温度进行脱毒。所用甲醛溶液等级应不低于化学纯。

　　2.2 脱毒试验

　　每瓶取样，用体重300～400g豚鼠1只，皮下注射10ml。精制毒素脱毒者可事先用生理盐水稀释成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天进行观察，动物不应有破伤风症状，到期每只动物体重不得较注射前减轻且健存者为合格，发生破伤风症状者应继续脱毒，体重减轻者应予重试。

　　2.3 脱毒试验合格的类毒素应做Lf测定。类毒素应为黄色或棕黄色透明液体。

　　2.4类毒素之保存时间，自脱毒合格之日起保存于2～8℃不得超过3年。

　　3 精制

　　3.1 毒素或类毒素可用等电点沉淀、超滤、硫酸铵盐析等方法或其他适宜方法精制。

　　3.2 用于精制的类毒素应透明，无肉眼可见之染菌。

　　3.3 精制时所用化学药品等级应不低于化学纯或符合《中国药典》规定，蒸馏水应新鲜。

　　3.4 类毒素精制后应加0.01%(g/ml)硫柳汞防腐并尽快除菌过滤。

　　3.5用同一菌种、培养基处方、精制方法制造的类毒素在同一容器内混合均匀后除菌过滤者为1批。

　　4 精制类毒素的检定和保存

　　4.1pH值应为6.6～7.4。

　　4.2 无菌试验

　　按《生物制品无菌试验规程》进行。无菌试验不合格时可重新除菌过滤，如制品有肉眼可见之染菌应废弃。

　　4.3 效价测定

　　每瓶取样进行Lf测定。测定方法见1.3.3项。

　　4.4 纯度

　　精制类毒素的纯度应在1500Lf/mgPN以上。

　　4.5 安全试验

　　每亚批取样，等量混合，用生理盐水稀释为250Lf/ml，用体重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射2ml。于注射后第7、14、21天进行观察并称体重。动物不应有破伤风症状，局部无化脓、坏死，到期每只动物体重比注射前增加者为合格。

　　4.6 保存与效期

　　保存于2～8℃。类毒素精制者自精制之日起，先精制后脱毒制品从脱毒试验合格之日起，效期为3年半。

　　5 吸附剂配制

　　5.1 吸附剂配制过程所用的器具应清洁、蒸馏水应新鲜，各种药品等级应不低于化学纯。

　　5.2 配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝加氢氧化钠法，用氨水配制者需透析除氨后使用。

　　5.3配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异物。

　　5.4 氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。

　　6 吸附精制类毒素的制造

　　6.1 吸附制品每ml应含精制破伤风类毒素7～10Lf。

　　6.2 氢氧化铝用量不得超过3mg/ml。

　　6.3 吸附制品应加0.005%～0.01%(g/ml)硫柳汞为防腐剂。

　　6.4同批精制类毒素用同批吸附剂吸附者为1批，用大罐吸附时每罐为1批，但所用精制破伤风类毒素、氢氧化铝各不得超过3批。

　　7 成品检定

　　7.1 理化性状

　　7.1.1吸附精制破伤风类毒素振摇后为乳白色均匀悬液，无摇不散的凝块及异物。

　　7.1.2pH值应为6.0～7.0。

　　7.1.3 氢氧化铝含量不应超过3mg/ml。

　　7.1.4 氯化钠含量应为0.75%～0.9%(g/ml)。

　　7.1.5 硫柳汞含量不应超过0.01%(g/ml)。

　　7.1.6 游离甲醛含量不应超过0.02%（g/ml）。

　　7.2 无菌试验

　　按《生物制品无菌试验规程》进行。

　　7.3 安全试验

　　每亚批取样等量混合，用体重300～400g，豚鼠4只，每只注射2.5ml于腹部皮下，注射后于第7、14、21天各观察1次并称体重，动物不应有破伤风症状，注射部位无化脓、坏死，到期体重比注射前增加者为合格。

　　7.4 效力试验

　　每亚批取样等量混合，用体重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml，第30天采心血，分离血清，等量混合，测定破伤风抗毒素单位，至少应含1IU/ml。

　　抗毒素单位测定方法：

　　用pH7.0～7.4之硼酸硼砂缓冲生理盐水，将被检血清做系列稀释，各取1ml放入一列试管中，然后各加入5个L+/100量破伤风标准毒素1ml（由0.05IU/ml破伤风标准抗毒素标定），盖上胶塞，混合均匀，放37℃结合45分钟，每个混合液各用体重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml。

　　同时设对照组，即取0.05IU/ml的标准抗毒素1ml，加入5个L+/100的标准毒素1ml，放37℃结合45分钟。用体重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml，每日观察动物发病情况并记录。以72～120小时动物全部死亡为判定标准。

　　以被检样品与对照组动物死亡数相同之最高稀释度判定之。

　　亦可按WHO推荐的效力检定方法（见附录）进行。

　　7.5 稳定性试验

　　生产工艺有改变时应做稳定性试验。抽3批不同批号的精制类毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期结束之日，进行效力检定，应符合规程要求。

　　7.6 鉴别试验

　　抽取样品加枸橼酸钠将吸附剂溶解后作絮状试验，或将样品调pH至9.0作凝胶免疫沉淀试验，以出现絮状反应或免疫沉淀反应者为合格。

　　8 保存与效期

　　保存于2～8℃。自吸附之日起效期为3年半。

　　附录WHO推荐的破伤风类毒素效价测定方法（毒素攻击法）

　　1 免疫及攻击

　　用生理盐水将吸附破伤风类毒素标准品和待检样品以2倍稀释法稀释成3～5个稀释度（中间的稀释度必须在攻毒后能保护约半数动物）。每一稀释度样品免疫体重14～16g小白鼠14只（或250～350g豚鼠至少10只）。另外10只小白鼠不注射作为对照（另外5只豚鼠不注射作为对照）。免疫4周，每只免疫小白鼠攻击破伤风毒素50LD₅₀(免疫豚鼠攻击100LD₅₀)，皮下注射0.5ml。对照组健康小白鼠注射25倍稀释的上述毒素（对照组豚鼠注射100倍稀释的上述毒素），每只皮下注射0.5ml，攻击后观察5日，每日记录结果。

　　2 试验成立应具备的条件

　　（1）检品的最低稀释度能保护半数以上动物。

　　（2）检品的最高稀释度能保护半数以下动物。

　　（3）对照组动物应部分死亡而不全部死亡。

　　（4）检品和标准品的剂量反应曲线在平行性及直线性上没有太大的偏差。

　　3 结果计算

　　用平行线分析法进行结果计算。

　　4 结果判定

　　待检样品的效价每个剂量应不少于40IU。如95%可信限大于50%～200%则95%可信限的低限效价应大于40IU/1个人用剂量。

吸附精制破伤风类毒素使用说明书

　　本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸附制成。用于预防破伤风。

　　本品为乳白色均匀混悬液，含防腐剂硫柳汞，长时间放置后吸附剂下沉，溶液上层应澄明无色，但经振摇后能均匀分散。

　　接种对象

　　主要是发生创伤机会较多的人群，孕妇接种本品可预防产妇及新生儿破伤风。

　　用法

　　1.上臂三角肌肌内注射。

　　2.剂量

　　（1）无破伤风类毒素免疫史者应按附表方法进行全程免疫。

　　（2）经全程免疫和加强免疫之人员，自最后1次接种3年以内受伤时，不需注射本品，超过3年者应用本品做1次加强注射，严重污染的创伤或受伤前未经全程免疫者，除注射本品外，可酌情在另一部位注射破伤风抗毒素。

　　（3）用含破伤风类毒素的混合制剂做过全部免疫者，以后每10年用本品做1针加强注射即可。

全程免疫 第1年

第2年 第1针（间隔4～8周）

第2针

注射1针 1.5

1.5

0.5 加强免疫 以后一般每10年注射1针，如遇特殊情况也可5年加强1针 0.5

　　孕妇可在妊娠第4个月注射第1针，6～7个月时注射第2针，每次注射0.5ml。

　　禁忌

　　患严重疾病、发热或有过敏史者及注射破伤风类毒素后发生神经系统反应者禁用。

　　反应

　　注射本品后局部可有红肿、疼痛、发痒，或有低热、疲倦、头痛等，一般不需处理即行消退。

　　注意事项

　　1.使用时应充分摇匀，如出现摇不散之凝块、异物，安瓿有裂纹，制品曾经冻结，标签不清及过期失效者均不可使用。

　　2.注射后局部可能有硬结，1～2个月即可吸收，注射第2针时应换另侧部位。

　　3.应备1∶1000肾上腺素，供偶有发生休克时急救用。

　　保存

　　保存于2～8℃暗处，不可冻结。