皮上划痕人用炭疽活菌苗制造及检定规程

皮上划痕人用炭疽活菌苗制造及检定规程

　　本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞悬液。专供预防炭疽病之用。

　　1　菌种

　　1.1 菌种来源

　　为无荚膜，水肿型，具有一定残余毒力，免疫原性较好的A16R菌株。由中国药品生物制品检定所分发或经同意。

　　1.2菌种应以冻干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年应全面检定其培养特性、残余毒力、安全性及免疫力，建立种子批。生产前只检查菌形，培养特性及噬菌体特异性。

　　1.3菌种检定

　　1.3.1 培养及生化特性

　　在牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基上生长，菌落为灰白色，不透明，呈卷发状。为革兰氏阳性大杆菌，呈链状排列。无运动力。能够形成芽胞。液体培养呈絮状发育，在血清培养基上不形成荚膜。能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不分解水杨苷。

　　1.3.2 残余毒力试验

　　用体重350～400g健康豚鼠5只，各皮下注射0.5亿/ml的牙包悬液1ml。另用体重18～20g小白鼠5只，各皮下注射0.5亿/ml的芽胞悬液0.1ml。观察10天，3只以上动物应出现水肿，可有特异死亡。但脏器涂片只应找到无荚膜的本菌。若全部动物不出现水肿，应重试。重试仍无水肿，菌种不得用于生产。

　　1.3.3 安全试验

　　用体重2.0～2.5kg分健康家兔10只，各皮下注射2.5亿/ml的芽胞悬液1ml，观察10天，在注射部位可出现水肿，全部动物应活存。如有死亡，应用同数动物重试，重试仍有死亡，菌种不得用于生产。

　　1.3.4 免疫力试验

　　上述安全试验动物于注射后18～20天，用炭疽毒菌攻击，各皮下注射20个MLD。同时用同体重的健康家兔3只，各皮下注射1个MLD作为对照。观察10天，对照动物死亡3只。试验组保护60%；对照组死亡2只，试验组保护80%为合格。对照动物死亡1只或无死亡，为对照不成立，应重试。

　　2　制造

　　制造菌苗的工作室及设备应当专用，不得与其他细菌工作混用。生产中应严格执行无菌操作，非制造菌苗用的其他炭疽菌株不得带到生产工作室内。

　　2.1 菌种

　　接种牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基，于34℃培育18～20小时，经检查为纯菌者，保存于2～8℃，在2周内供作生产种子用。

　　2.2 培养基

　　用pH7.2～7.4牛肉消化液琼脂或其他培养基。

　　2.3 种子

　　将供制造用菌种，移种于牛肉消化液中。于34℃培育20～24小时，检查其生长特性、菌形及纯度，应符合1.3.1项要求。

　　2.4 接种

　　经检查合格之种子培养物，接种于牛肉消化液琼脂上，置33～34℃培育。成熟的典型芽胞达至80%以上、无杂菌者采集。

　　2.5 采集

　　将培养物刮入50%（ml/ml）甘油蒸馏水原液瓶内，振摇使成均匀悬液。每瓶取样按《生物制品无菌试验规程》进行纯菌试验。

　　2.6 合并

　　将纯菌试验合格之原液进行合并分批，取样做纯菌试验、浓度测定及活菌计数。

　　2.6.1 纯菌试验

　　按《生物制品无菌试验规程》进行。

　　2.6.2 浓度测定

　　按中国细菌浊度标准测定浓度。

　　2.6.3 活菌计数

　　取0.5亿/ml的菌液1ml，按10倍系列稀释至10^-5。取10^-5稀释菌液接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。置37℃培育24小时，计算每ml菌苗的芽胞活存率。芽胞活存率在50%以上为合格。

　　2.7 稀释分装

　　2.7.1 稀释

　　用灭菌的50%甘油蒸馏水将原液稀释成每ml含芽胞40亿个，即为皮上划痕用菌苗。同批原液稀释之菌苗为作1批。稀释若干大瓶时，应按瓶号分为亚批。

　　2.7.2 分装

　　皮上划痕用菌苗按20人份/ml分装。规格为每安瓿1或2ml，抽样进行成品检定。

　　3　成品检定

　　3.1 物理检查

　　应为灰白色之均匀悬液，无异物及摇不散之菌块。

　　3.2 纯菌试验

　　按《生物制品无菌试验规程》进行。

　　3.3 浓度测定

　　按中国细菌浊度标准测定浓度，应为每ml含菌40亿±20%

　　3.4 活菌计数

　　按2.6.3项进行。

　　3.5 安全试验

　　每批菌苗用体重2.0～2.5kg，健康家兔5只，各皮下注射2.5亿/ml的芽胞悬液1ml。观察10天。可有水肿，全部动物应活存。如有死亡，应用加倍量动物重试。如仍有死亡，判为不合格。

　　3.6 免疫力试验

　　每5批菌苗或不足5批者，至少抽检1批（可利用安全试验的动物）按1.3.4项进行。

　　4　保存与效期

　　应保存于2～8℃。自检定合格之日起效期为2年。

皮上划痕人用炭疽活菌苗使用说明书

　　严禁注射！

　　本品系用弱毒炭疽菌株制成的50%甘油活芽胞悬液。专供预防炭疽病之用。

　　本品为灰白色均匀悬液，无异物或摇不散的菌块。

　　接种对象

　　炭疽病常发地区人群、皮毛加工与制革工人、放牧员以及其他与牧畜密切接触者，应每半年或1年接种1次。

　　用法

　　1.用消毒注射器吸取菌苗，在消毒过的上臂外侧上部滴菌苗两滴，相距3～4cm。划痕时用手将皮肤绷紧，用消毒划痕针在每滴菌苗处作“井”字划前，每条痕长约1～1.5cm。划破表皮以现出间断小血点为度。

　　2.用同一划痕针反复涂压，使菌苗充分进入划痕处。接种后局部应裸露至少5～10分钟，然后用消毒干棉球擦净。

　　3.接种后24小时划痕部位无任何反应者应重新接种。

　　禁忌

　　患严重疾病、免疫缺陷症、严重皮肤病，用免疫抑制剂治疗者，有严重过敏史者不予接种。

　　注射事项

　　1.本品仅供皮上划痕用，严禁注射。

　　2.凡制品内有摇不散的菌块或安瓿有裂纹、过失效期等均不能使用。

　　3.用前应将菌苗充分摇匀。消毒皮肤只用酒精，不用碘酒。

　　4.菌苗安瓿启开后，应于3小时内用完。

　　5.剩余菌苗，空安瓿及用具，需用3%碱水煮沸消毒30分钟。

　　保存

　　应保存于2～8℃。