（二）EC与基膜粘附 EC与基膜经整合素介导，以灶性接触（focal contact）的方式发生粘附，形成粘附斑（adhesion plaque）。整合素分子由两个非共价键结合的亚单位组成，两条链均为完整的膜蛋白，其分子量分别为120-180kD和90-180kD。整合素以跨膜受体的形式存在，桥接细胞外基质蛋白与细胞骨架蛋白（即肌动蛋白、纽带蛋白和α-辅肌动蛋白）。整合素与配体结合的特点是，一种整合素可与多种配体结合，而同一种配基亦可与多种整合素结合。已知的整合素已超过21种，介导EC与基膜间粘附的主要由β1和β2参与组成的整合素。新近发现，EC与基膜间粘附对纤维内皮屏障完整性具有明显意义。用合成肽Gly-Arg-Ser(GRGDS)阻断整合素的RGD基团与胶原蛋白、纤维连接蛋白、波影蛋白和层粘蛋白结合，结果导致EC收缩变圆，甚至从基膜上脱落，从而引起内皮通透性增高[12]。
EC与基膜间粘附影响内皮通透性的机制尚未阐明。Burridge认为，基膜中的胶原、纤维连接蛋白、层粘蛋白和波影蛋白与整合素的细胞外区（N-末端）结合；F-肌动蛋白则通过α-辅肌动蛋白与纽带蛋白相连，纽带蛋白再通过talin与整合素的细胞内区（C-末端）连接。这样，整合素不仅介导了EC与基膜间粘附，还将细胞骨架蛋白与基质蛋白“串连”起来，具有显著的生物力学意义。当内皮受到炎性介质刺激时，EC的F-肌动蛋白骨架发生重排，中心张力的变化即可沿上述结构传至基膜；同样，基膜产生的任何力学变化也可逆向传入细胞内。电镜发现EC中的应力纤维与粘附斑的胞浆区存在清晰的粘附点，为上述假设提供了直接证据。纤维连接蛋白粘附。用纤维连接蛋白处理牛肺动脉内皮，结果抑制了TNFα诱导的通透性增高。另有报道，一种非整合素家族的跨膜蛋白GP116也可介导EC与基膜间粘附，参与内皮屏障功能调节[2]。
三、内皮屏障功能调节的信号转导
任何刺激均需通过相应的信号转导系统，将刺激信号传入EC中，才能对内皮屏障功能产生影响。G蛋白、磷脂酶C（PLC）、蛋白激酶C（PKC）、酪氨酸激酶（TK）及肌球蛋白轻链（MLC）均参与了内皮屏障功能调节的信号转导。
（一）G蛋白 G蛋白是一类由Gα、Gβ、Gγ亚基构成的异三聚体蛋白，有Gs、Gi、Gq、G12四类共十几种亚型。G蛋白与膜受体偶联，将刺激信号传至PLC（特别是PLCβ）、磷脂酶A2（PLA2）、腺苷酸环化酶（AC）、磷酸二酯酶和离子通道。G蛋白激活是从受体将信号传入EC，并触发细胞骨架收缩过程中的关键环节之一。配体与特异受体结合，导致不同G蛋白亚型的激活。例如H1组胺受体激活时，胞内三磷酸肌醇（IP3）和Ca2+水平升高，提示该反应可能与Gi或Gq蛋白偶联。而H2组胺受体受到刺激时，AC被活化，cAMP含量增加，表明H2受体与Gs蛋白偶联[1]。G蛋白对刺激信号有放大作用。一个受体可与多个G蛋白偶联，而一个G蛋白可同时激活多条信号通路。百日咳毒素能使某些G蛋白亚型与受体失偶联，阻断信号转导。例如与组胺受体偶联的G蛋白即属百日咳毒素敏感型；而与α凝血酶和缓激肽受体偶联的G蛋白则属百日毒素非敏感型[2]。
（二）PLC信号 PLC的主要作用底物是三种磷脂肌醇，即4，5二磷酸磷脂肌醇（PIP2），4-磷酸磷脂肌醇（PIP）和磷酸磷脂肌醇（PI）。PIP2水解产生IP3和二酰基甘油（DAG）。PIP和PI水解只产生DAG，不产生IP3。IP3与内质网上的受体结合使内贮Ca2+释放入胞浆，导致[Ca2+]i升高。实验发现，α-凝血酶刺激培养牛肺动脉内皮细胞（BPAEC）后，10秒内IP3水平明显升高，20秒降至基础水平；Ca2+]i约17秒升至峰值，从基础水平59±8nmol/L升至同定Ca2+释放引起，第二时相则由Ca2+内流引起[13]。磷脂肌醇水解产生的第二信使DAG和IP-3是α-凝血酶诱导上皮通透性增高的关键信号。
Ca2+和DAG通过多条效应途径参与内皮屏障功能调节。Ca2+和DNG均可直接激活PKC；[Ca2+]i升高也能激活PLC和PLA2。PLC和LPA2分解膜磷脂产生DAG和花生四烯酸。后两者具有潜在激活PKC的活性，这可能是炎性介质引起内皮通透性增高后纤维较长时间的机制之一。花生四烯酸代谢产生可能也参与了内皮屏障功能的调节。以去二氢愈创木酸抑制花生四烯酸的脂氧化酶代谢途径，结果[Ca2+]i升高的第二时相消失，也抑制α-凝血酶诱导的血管内皮通透性增高。
（三）PKC激活 组胺、α-凝血酶等炎性介质可引起内皮屏障功能损害。它们通过与膜上的受体结合，激活偶联G蛋白，进一步激活PLC；氧自由基、血流剪切力损伤内皮屏障则不经受体结合，直接激活PLC。上述两类损伤因素激活PLC的途径虽不同，但最终都激活PKC。
PKC是参与细胞信号转导的一组重要蛋白质。目前在哺乳动物中至少发现10种亚型，均具有不同的底物特异性。根据其对Ca2+、DAG和磷脂酸丝氨酸（PS）三种激活剂的反应分类三类：第一类包括α、β1、βⅡ和γ，均能被三种激动剂激活；第二类包括ε、δ、θ和η，由PS和DAG激活，对Ca2+不敏感；第三类包括ξ和λ，由PS激活，对DAG和Ca2+不敏感。研究发现，α-凝血酶诱导内皮通透性增高时，[Ca2+]i升高，PKC激活；阻断Ca2+内流，则PKC激活和内皮通透性增高受到抑制。参与内皮屏障功能调节的PKC亚型尚不完全清清楚楚，但已知由Ca2+激活的PKC主要是PKC-α和PKC-β。凝血酶和过氧化氢诱导的内皮通透性增高由Ca2+激活的PKC介导；缓激肽诱导的内皮通透性增高则由DAG激活的PKC介导。这表明内皮通透性调节的信号转导随激动剂不同而有差异。EC中PKC激活分为两个时相[14]，第一时相快速、短暂，主要由DAG和Ca2+快速增加引起；第二时相出现较晚，持续时间较长（约1小时），可能仅由DAG引起。介导第二时相的DAG来源于PLC和磷脂酶D（PLD）水解磷脂酰胆碱。
（四）TK激活 内皮屏障功能受损的另一条途径由TK介导[13]。TK的主要作用是使细胞骨架蛋白如纽带蛋白、talin、β-catenin磷酸化，从而使细胞之间、细胞与基膜之间的连接发生改变，EC收缩变圆，内皮通透性增高。炎性介质如α-凝血酶诱导的TK激活可能由跨膜G蛋白介
