3 HCV外膜糖蛋白与疫苗研究
HCV外膜蛋白为HCV疫苗研制的首选抗原。以HCV外膜区基因为基础的疫苗首先必须解决其变异问题。Cloo等用Hela细胞表达的重组HCV e1/E2免疫黑猩猩后，用10CID的同型病毒攻击，结果7只中有5只受到了保护，而对照组则发生急、慢性感染，结果表明HCV的外膜抗体具有一定的中和能力。但这种保护是“单特异性”的，仅对同型病毒的再感染有保护作用[12]。这是由HCV的基因变异决定的，HCV不仅存在多种基因型和亚型，在同一个体中，也包含多个相似株（quasispecis），在感染的不同阶段，相似株也发生变异。针对HCV的混合抗体或许对清除感染有用。最近，Puntoriero根据200份不同的HCV分离株的E2 hVR1序列，构建了HVR1噬菌体肽库，从中筛选出能和较多血清发生反应的噬菌肽，用这些肽去免疫动物，产生的抗血清可以和90%以上不同的HVR1合成肽发生交叉反应，用这种多条噬菌体作为抗原可以解决HCV膜区基因高变问题。但是，该研究中使用的抗原仍然是合成肽，并且其在动物实验中的保护作用还有待进一步研究[13]。
其次，以HCV外膜区为基础的疫苗的另一个难题是膜区蛋白的来源问题，通过体外表达获得足量具有天然构象或与天然构象类似的蛋白是HCV疫苗新的来源。最近，Baumert等构建了只含HCV结构基因（即HCV/C、E1和E2）的杆状病毒表达质粒，在该质粒转染的相同，颗粒含有部分HCV rNA，说明没有非结构区，没有HCV本身的RNA聚合酶，同样可以完成病毒RNA的复制和病毒包装[14]。这就为体外获得具有天然构象的HCV膜抗原提供了一条途径，为HCV的疫苗研究奠定了基础。Lagging将HCV膜基因，即HCV e1（174～359）和E2（371～742）基因连接在疱疹性口炎病毒（VSV）G蛋白跨膜内区基因相连，这样在E1、E2的C端提供了一个能在膜上锚定的信号，可使镶嵌蛋白在细胞的膜表面得到表达，采用VSV的温敏株（ts045）以及在不能耐受（40.5℃）条件下培养.转基因细胞则可产生VSV/HCV假病毒颗粒,该假病毒颗粒具有再感染哺乳动物细胞的能力,用同型E抗原免疫黑猩猩所获得的免疫血清可抑制VSV/HCV假病毒绵感染性[15],充分表明HCV外膜抗原可用于免疫研究获得中和性抗体,同时,在体外表达系统中可以获得具有结构、功能与天然病毒相似的膜蛋白，该蛋白中含有的构象表位产生的抗体，可能具有保护作用。
近年来，核酸疫苗技术的出现，为丙型肝炎的防治提供了一个新的机遇。DNA疫苗是直接将含有编码抗原基因的真核表达质粒DNA注入体内，经T细胞摄取、转录、翻译、表达出相应抗原，然后通过不同途径刺激机体产生针对此种抗原的免疫应答，在HCV防治中，核酸疫苗与传统的重组疫苗及肽疫苗相比，具有多方面的优势：（1）基因免疫具有交叉保护作用，有利于克服HCV外膜基因的高变性给疫苗研制带来了困难。（2）核酸免疫的抗原多肽的提呈过程与自然感染时相似，直接将具有天然构象的蛋白呈递给免疫系统，不会造成构象性表位的改变或丢失；（3）基因免疫同时诱发机体的体液免疫与细胞免疫，效果更好。
以含有HCV外膜基因为基础的核酸免疫，现在已进行了多方面的尝试。Lee等构建了不同的含有HCV/E1基因的表达质粒，其中包括含有质粒-单细胞集落刺激因子（GM-CSF）的融合基因质粒。结果表明，含有GM-CSF的融合质粒与只有包膜区基因的质粒相比，诱导的抗体反应和淋巴细胞增殖反应均大大增强，用双顺反子质粒使HCV/E和GM-CSF同时表达，获得最佳免疫效果。同时，产生的强烈的体液免疫反应，除了可产生针对相同基因型病毒膜抗原的HVR1的抗体反应上，还可产生针对异型病毒HVR1的抗体[16]。Nakano等的研究也证实以la型的E2区构建的质粒进行基因免疫产生的抗体也可同lb型E2区抗原发生反应[17]。有研究表明，经DNA免疫的小鼠产生针对HVR1的交叉反应性抗体识别的位点主要位于HVR的C未端，而自然感染过程产生的针对HVR1的交叉反应性抗体识别的表位亦位于HVR1的C末端，充分表明核酸免疫与自然感染过程类似[18]。
虽然DNA疫苗还存在安全性问题，即外源DNA是否会与宿主细胞染色体整合而影响某些癌基因或抑制基因的表达。自身免疫及过敏抗体，但由于DNA疫苗与传统的蛋白质疫苗相比，制备简单、成本低廉，这将使DNA疫苗的推广应用成为可能。对HCV核酸疫苗的进一步研究。必将对控制HCV的感染及传播起重要作用。
4 结 语
总之，近年来使用重组蛋白及合成肽的研究表明，在HCV膜区存在多个B细胞表位，抗外膜蛋白抗体的检出率高度依赖于抗原获得的方法、不同的感染阶段以及检测模式，针对HCV包膜区线性表位的体液免疫对机体的保护作用不大。随着噬菌体呈现技术、转细胞技术、核酸免疫技术等用于HCV感染的致病机理及疫苗研究，期望；（1）能通过使用多价混合疫苗解决HCV的变异难题；（2）在体外获得足量具有天然构象的HCV外膜抗原作为新型的重组疫苗；（3）开发能同时产生具有体液免疫和细胞免疫保护的DNA疫苗；（4）建立HCV感染的细胞模型及动物模型，进一步研究病毒宿主相互的关系，可望对发展有效的HCV疫苗提供帮助。
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