近年来人们发现某些藻类多糖具有明显的抗肿瘤作用［1］。我们从海带中提取了一种天然生物大分子海带多糖(Laminarin sulfate,LAS),由L-岩藻糖、D- 半乳糖等糖基组成的硫酸酯化多聚物,平均分子量为1.5×105。该多糖对小鼠肉瘤S180的抑制率可达86.5%。本研究初步观察了LAS对小鼠腹腔巨噬细胞(Peritoneal macrophages,PMΦ)的激活作用,以探讨其抑瘤作用机理。
1 材料与方法
1.1 材料 昆明种小鼠,性别不限,18～ 22 g,由山东省实验动物中心提供; 雄性Balb/c小鼠,由山东医科大学提供。LAS为本室产品;RPMI1640培养基为GIBCO产品;3H-TdR由中国原子能研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 PMΦ的体内激活及活性测定
1.2.1.1 PMΦ的体内激活与收集 小鼠腹腔注射LAS 0.2 ml后第3天无菌条件下取腹腔渗出细胞调整细胞浓度为1.0×106 ml-1,分别向无菌24孔及96孔培养板内加入细胞悬液1.0、0.1 ml,每样本均设3个复孔,并设空白对照孔, 置37 ℃,5%CO2培养箱内孵育2 h，收集未粘附细胞并计数,培养板内为PMΦ单层。
1.2.1.2 PMΦ过氧化物酶活性的测定 参照文献［2］方法进行。
1.2.1.3 PMΦ吞噬功能的测定 参照文献［3］方法进行。
1.2.1.4 PMΦ细胞毒性测定 参照文献［4］方法进行。
1.2.2 PMΦ IL-1的诱生及活性测定 参照文献［5］进行。
2 结果
2.1 PMΦ的诱生 小鼠i.p.给LAS后,其PCs数及粘附细胞的比率均显著增加。PCs的诱生呈剂量依赖性关系,而粘附细胞的比率与LAS的剂量呈倒“U”型关系(P＜0.01;P＜0.05，n=3)。
2.2 PMΦ过氧化物酶活性的测定 i.p.给药2 d后,小鼠PMΦ过氧化物酶活性均显著增强,其中以40 mg/kg为最佳。
2.3 PMΦ吞噬功能的测定 小鼠i.p.注射LAS 2 d后,PMΦ吞噬功能均得到显著提高, 其中以40 mg/kg剂量为最佳。
2.4 PMΦ细胞毒性测定 小鼠i.p.LAS 2 d后, LAS 20～80 mg/kg均可显著增强PMΦ细胞毒活性。
2.5 LAS诱导和促进IL-1产生 PMΦ在体外经不同浓度LAS作用48 h,IL-1 样活性物质的分泌明显增加,在15～120 μg/ml浓度的范围内IL-1 的产生具有较好的剂量依赖性关系。
3 讨论
巨噬细胞为机体抗肿瘤和杀灭入侵病原微生物的效应细胞，小鼠给LAS后, PMΦ数量显著增加,且呈剂量依赖性关系, LAS在体内外均可激活PMΦ, 并分泌一些细胞毒效应分子,如H2O2、IL-1;可提高PMΦ的过氧化物酶活性及吞噬功能，并使其细胞毒作用得到增强。综上所述,LAS对小鼠PMΦ具有较强的免疫调节作用,可能是其抑瘤的重要机制之一。■
①国家九五科技攻关计划资助项目(96-C01-05-02)
作者简介：宋剑秋,男,25岁,助教,主要从事医学免疫方面的研究；
王海仁,男,63岁,教授, 主要从事生化及分子生物学方面的研究与开发
作者单位：王海仁(山东大学生物化学与分子生物学系 济南 250100)
参考文献：
［1］Yamamoto I.Lamimaria and health. J Ocean Medication，1986；2：59
［2］Andrea L, Jozsef T, Karoly L. Effect of lentinan on macrophage cytotoxicity against metastatic tumor cells. Cancer Immunol Immunother， 1993；36:123
［3］Iwao S,Koichi H,Naohito O et al. Immunomodulation by orally administered β - glucan in mice. Int J Immunopharmac，1990；6：761
［4］薛 彬.免疫毒理学实验技术.北京:北京医科大学,中国协和 医科大学联合出版社，1995:57
［5］Iwao S,Hideki T,Akira K et al. Effect of orally administered β-glucan on macrophage function in mice.Int J Immumopharmac，1989；12：6
