一、材料和方法
1.材料选自我院近年来手术切除的肺大体标本182份,其中肺恶性肿瘤95例(腺癌36例、鳞癌40例、小细胞癌14例、类癌4例、恶性纤维组织细胞瘤1例);其他非肺恶性肿瘤87例,包括肺结核41例,支气管扩张12例,肺脓肿12例,肺曲菌球感染7例,肺囊肿7例,肺其他良性疾病8例。肺癌组年龄30~74岁,平均51.8岁,男女性别比3∶1;非肺癌组年龄7~66岁,平均35.8岁,男女性别比1.5∶1。
2.标本常规甲醛固定石蜡包埋制片(厚5 μm),半乳糖氧化酶试剂购自Sigma化学公司(G-740010 000 units,Lot85H6847)。染色参照Abulkalam等[1]及Xu等[2]半乳糖化酶-Schiff试剂方法加以改进:(1)石蜡切片脱蜡,置蒸溜水浸洗10 min;(2)0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸钾缓冲液浸洗10 min;(3)用上述缓冲液配制的半乳糖氧化酶液(100 u/ml)37℃孵育4~5 h;(4)蒸馏水洗10 min(其中换2次水);(5)与Schiff试剂反应20~30 min,(6)自来水冲洗10 min;(7)Harris苏木素染色1~2 min;(8)1%盐酸酒精分化数秒,然后自来水冲洗,常规脱水透明中性树胶封片。镜下观察:于胞质、腺腔内出现红色产物者定为阳性。
二、结果
1.95例瘤组织检测为阳性仅见于腺癌,其阳性率为36.11%(13/36),鳞癌、小细胞癌等均阴性,阳性产物位于腺癌胞质、腺腔缘及腺腔的粘液中。
2.肺癌支气管断端检测有意义者(粘膜组织结构完整者)85例,阳性率71.76%(61/85),阳性产物位于粘膜下腺体的胞质及腺腔粘液中,由数个细胞到数个腺体不等,粘膜上
皮细胞阴性。尽管鳞癌、小细胞癌等瘤组织阴性。但其支气管断端粘膜下腺体为阳性。
3.非肺癌病例87例,检测病变肺支气管断端及病灶阳性率71.26%(62/87)。阳性产物位于病灶中残存的腺体及支气管粘膜下腺体,也由数个细胞到数个腺体不等,而粘膜上皮阴性。
4.肺癌和非肺癌病变肺支气管粘膜下腺体的阳性率经统计学分析结果χ2=0.0056,P>0.9,差异无显著性。
三、讨论
双糖残基位于末端连接唾液酸的糖链上,当细胞膜上糖基转移酶异常或缺如时暴露,可被半乳糖氧化酶氧化,而与Schiff试剂反应生成红色产物而得以显示。Abulkalam等[1]和Xu等[2]等证明其表达于结直肠癌及癌前病变的粘液中。近年李昕等[3]在肺癌患者的痰液中也检测到双糖残基的表达,建议为人群肺癌普查方法。我们用此方法对肺癌组织进行检测,发现它表达于肺癌的腺癌组织(阳性率36.11%)和不同组织类型的肺癌支气管断端的粘膜下腺体(阳性率71.76%),而非腺癌的瘤组织和粘膜上皮未见表达。但我们在非肺癌的病变肺支气管断端及病灶中同样发现有表达(阳性率71.26%),因而我们认为双糖残基作为肺癌的鉴定指标应持谨慎态度。
参考文献:
[1]Abulkalam m, Shamsuddin MD ,Alaaeldeen M, et al. A Test for Detection of colorectal cancer. Hum Pathol, 1989,19:7-10.
[2]Xu H, Sakamoto K, Shamsuddin AM,et al. Detection of the tumor marker D-galactose-β-(1→3)-N-Acetyl-D-galactosamine in colonic cancer and precancer. Arch pathol Lab Med, 1992,116:1234-1238.
[3]李昕,戴晓淳,何安光,等.痰液T抗原检测——一种肺癌筛选的简易方法.中华结核与呼吸杂志,1995,18:285-286.